determination of cd markers profile of the cell line infected by s15 vaccine strain of theileria annulata schizont using rt-pcr analysis

The aim of this study was to identify the cell surface cluster of differentiation (cd) markers of the cell lines infected by theileria annulata schizont. the cd molecules are very useful for the characterization of cells and different subpopulations of leukocytes. they are usually recognized by specific antibodies using flow cytometry and immunohistochemistry. in the current study, we applied reverse transcriptase-polymerase chain reaction (rt-pcr) to define the profile of cell surface markers in a cell line infected by an attenuated s15 vaccine strain of t. annulata schizont and a new laboratory-established cell line infected by a non-attenuated form. in order to determine the specific markers that can be used for excluding the non-attenuated cell lines, the characterization of the surface proteins profile of the s15 vaccine cell line is important. the rt-pcr was carried out by specifically designed primers using a panel of seven bovine cd markers, as well as beta-actin as an internal control house-keeping gene. we showed that both of the examined cell lines had a consistent expression of cd4, cd5, cd11a, cd14, cd43, and cd45 markers. however, the specific finding in this study was the expression of b-cell markers cd79a and cd5 by the newly-transformed cell line. on the other hand, cd5 as a marker for b-cell subset was expressed by s15 vaccine strain. in conclusion, we consider cd79a surface protein as a new marker for the cell lines infected by non-attenuated t. annulata schizont, while the cell lines infected by the vaccine strain do not express this marker. in addition, the identification of cd marker expression based on the rt-pcr assay might be a suitable and appropriate alternative technique for flow cytometry.

تعیین الگوی بیان CD مارکرهای دو رده سلولی آلوده به شیزونت تیلریا آنولاتا "سویه واکسن S15" و "سلول ترانسفرمه شده در آزمایشگاه" به روش RTPCR

هدف از این مطالعه تعیین مارکرهای سطحی سلولی یا CD در دو رده سلولی سویه واکسن S15 و رده سلولی ترانسفورمه شده در شرائط آزمایشگاهی بود. مارکرهای CD­ در شناسایی سلول ها و تحت رده­های مختلف لکوسیت­ها بسیار مفید هستند. آنها معمولاً به وسیله آنتی بادی های اختصاصی و با روش­های فلوسیتومتری و ایمونوهستوشیمی تشخیص داده می­شوند. در این مطالعه تاکید بر استفاده از روش RTPCR بمنظور تعیین بیان ژن­های مارکرهای سلولی لکوسیت­های گاوی بود. شناسایی الگوی پروتئین­های سطحی سلول واکسن تیلریوز از آن جهت اهمیت دارد که با شناخت مارکرهای خاص بتوان آن را از سایر رده­های سلولی غیر واکسن یا وحشی متمایز ساخت. روش RTPCR  با پرایمرهای اختصاصی مربوط به هفت مارکر CD مربوط به لکوسیت­های گاوی به همراه ژن بتا اکتین بعنوان کنترل داخلی انجام شد. نتایج این بررسی نشان داد که هر دو رده سلولی قادر به بیان ژن­های مربوط به مارکرهای CD4، CD5، CD11a، CD14، CD43 و CD45 بودندکه قبلا نیز بعنوان مارکرهای مرتبط با رده های سلولی حاوی شیزونت تیلریا مطرح بودند اما یافته جدید در این مطالعه بیان مارکر اختصاصی لمفوسیت­های B یا CD79a بود که در رده سلولی ترانسفرمه شده در آزمایشگاه و در پاساژهای پایین فقط دیده شد و بیان مارکر CD79a در ارتباط با رده سلولی واکسن تیلریوز S15 مشاهده نشد. بنابراین شاید بتوان این مارکر را به عنوان فاکتوری اختصاصی برای رده­های سلولی تازه شکل گرفته و حاد مطرح نمود. علاوه بر اینکه در این مطالعه تعیین مارکرهای CD سلولی بر اساس روش RTPCR صورت گرفت که می­تواند به عنوان روشی مناسب، در شرائط خاص جایگزین روش فلوسیتومتری مطرح گردد.