quantification of melittin in iranian honey bee (apis mellifera meda) venom by liquid chromatography-electrospray ionization-ion trap tandem mass spectrometry (lc-esi-it-ms/ms)

The current research aimed to quantify melittin (mel) in iranian honey bee (apis mellifera meda) venom. to this end, a liquid chromatography-electrospray ionization-ion trap tandem mass spectrometry (lc-esi-itms/ ms) approach was employed. melittin is the main toxic peptide of honey bee venom with various biological and pharmacological activities. it was extracted with pure water from the bee venom samples. the analyses were performed on xbridge beh300 c4 column using a gradient method with the mobile phase consisting of ultrapure water and acetonitrile (containing 0.1% formic acid). signals of the melittin were recorded with the selected reaction monitoring (srm) mode, which is a quantitative approach capable of quantifying analyte peptides with high sensitivity and. the mass spectrum of mel was obtained in the positive ion mode and the quantification analysis was performed using precursor to product ion transition of m/z 570.2/669.9. this method demonstrated good linearity (r2˃0.997) in the range of 1-100 μg ml-1, with a limit of quantification (loq) of 1.0 μg ml-1. the content of mel in iranian honey bee venom accounts for 43–55% of total dry weight. this method can be used to evaluate the quality and authenticity of bee venom samples for different therapeutic applications of mel.

اندازه‌گیری کمی ملیتین در زهر زنبور عسل ایرانی (آپیس ملیفرا مِدا) با استفاده از کروماتوگرافی مایع یونیزاسیون افشانه الکتریکی طیف سنج جرمی تله یونی

در این مطالعه از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا مجهز به آشکارساز طیف سنج جرمی تله یونی با حد واسط افشانه الکتریکی (LCESIITMS)  برای شناسایی و اندازه گیری کمی ملیتین در زهر زنبور عسل نژاد ایرانی (آپیس ملیفرا مِدا) استفاده شده است. ملیتین با 26 اسید آمینه مهم­ترین جزء فعال زهر زنبور عسل می­باشد. عملکردهـای زیسـت شـناختی مختلفـی مانند فعالیت ضد باکتری، ضد قارچی، ضد ویروسی، ضد التهابی و همچنین ضد سرطانی از این پپتید گزارش شده است. در این روش ملیتین با استفاده از آب خالص از نمونه­های لیوفیلیزه زهر زنبور استخراج و به کمک فاز متحرک آب و استونیتریل (حاوی 1/0 درصد فرمیک اسید) با یک برنامه شویش شیبی روی یک ستون C4 جداسازی شد. اندازه گیری­های کمی ملیتین به روش پایش واکنش انتخابی (SRM) انجام شد که یک روش طیف سنجی جرمی متوالی با حساسیت و گزینشپذیری بالا می­باشد. محدوده خطی، حد اندازه گیری کمی (LOQ) ، دقت روش در یک روز و بین روز (RSD)، بازده استخراج و اثر ماتریکس به عنوان ارقام شایستگی روش محاسبه شد. این روش رفتار خطی مناسب در گستره غلظتی µg mL1 1001 با ضریب همبستگی (999/0) و حد اندازهگیری کمی µg mL1 1 نشان داد. به کمک این روش، غلظت ملیتین در نمونه­های زهر زنبور عسل ایرانی 43 تا 55 درصد وزن نمونه خشک بدست آمد. این روش سریع، دقیق و حساس می­تواند برای ارزیابی محتوای ملیتین در نمونه­های زهر زنبور عسل جهت استفاده­های مختلف پزشکی و درمانی به کار گرفته شود.