development of new modified simple polymerase chain reaction and real-time polymerase chain reaction for the identification of iranian brucella abortus strains

Brucellosis is primarily a worldwide zoonotic disease caused by brucella species. the genus brucella contains highly infectious species that are classified as biological threat agents. in this regard, the identification of brucella can be a time-consuming and labor-intensive process posing a real risk of laboratory-acquired infection to the laboratory staff. this study aimed to present a novel conventional and real-time polymerase chain reaction (pcr) assay for the identification of brucella abortus strains. regarding this, two primers (bru ab2) were designed based on the unique loci encoding autotransporter-associated beta strand repeat-containing protein (id:yp00113760). a total of 56 brucella strains (e.g., reference, vaccinal, and field isolates) and yersinia enterocolitica, as a non-brucella isolate, were evaluated in conventional and real-time pcr systems. the results of the study indicated that 0.4 ng and 400 fg of genomic dna of b. abortus strains can be detected by conventional and real-time pcr, respectively. the primers, bru ab2, were suitable for both pcr methods. both methods were specific for the detection of all strains of the bacterium; however, real-time pcr assay was 1000-fold more sensitive than the conventional pcr method. therefore, this new detection system could be a suitable selective modified method for the accurate identification of all b. abortus strains.

شناسایی مولکولی سویه‌های بروسلا آبورتوس در ایران با استفاده از روش‌های جدید تغییر یافته واکنش زنجیره‌ای پلیمراز و Realtime PCR

بروسلوز در درجه اول یک بیماری زئونوز پراهمیت در سراسر جهان است که توسط گونه­های بروسلا ایجاد می­شود. جنس بروسلا دارای گونه­های بسیار عفونی است که به عنوان عوامل تهدید کننده زیستی طبقه بندی می­شوند. شناسایی بروسلا یک فرآیند زمان گیر و سخت است که می­تواند پرسنل را در معرض خطر عفونت­های آزمایشگاهی قرار دهد. این تحقیق با هدف ارائه یک روش آزمایش جدید برای واکنش زنجیره­ای پلیمراز معمول و واکنش زنجیره­ای پلیمراز زمان واقعی (realtime PCR) برای شناسایی گونه­های بروسلا آبورتوس انجام شده است. در این مطالعه دو آغازگر (bru ab2) بر اساس جایگاه­های منحصر به فرد کد کننده انتقال دهنده خودی ((autotransporter واجد تکرارهای رشته بتا پروتئین (شماره دسترسی YP00113760) طراحی شده است. پنجاه و شش سویه بروسلا (جدایه­های مرجع، واکسن و جداسازی شده از مزرعه) و Yersiniaenterocolitica به عنوان یک جدایه غیر بروسلا در سیستم معمول و واکنش زنجیره­ای پلیمراز زمان واقعی مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج نشان داد که با مقادیر ng 0.4 وfg 400 DNA ژنومی سویه­های بروسلا آبورتوس می­توانند با استفاده از روش معمول و واکنش زنجیره­ای پلیمراز زمان واقعی شناسایی شوند. پرایمرهایbru ab2 برای هر دو روش واکنش زنجیره­ای پلیمراز مناسب بودند. هر دو روش برای شناسایی تمام سویه­های باکتری اختصاصی بوده اما آزمایش واکنش زنجیره­ای پلیمراز در زمان واقعی 1000 برابر حساس­تر از روش واکنش زنجیره­ای پلیمراز معمولی بود. از این رو این روش به عنوان روش انتخابی قدرتمند جهت شناسایی تمام گونه­های بروسلا آبورتوس پیشنهاد می­شود.