جداسازی و تخلیص آنزیم ال آسپاراژیناز از جدایه‌های استرپتومایسس خلیج‌فارس و بررسی بیان ژن کلون شده آن در باکتری اشریشیاکلی با real-time و sds-page

زمینه و هدف: آنزیم ال آسپارژیناز کاربرد موثر در درمان سرطان لوسمی لنفوبلاستیک دارد. این آنزیم از منابع باکتریایی جداشده و به‌صورت تجاری به‌عنوان داروی ضد سرطان عرضه می‌شود. هدف از این پژوهش جداسازی و تخلیص آنزیم ال آسپاراژیناز از جدایه‌های استرپتومایسس خلیج‌فارس و بررسی بیان ژن کلون شده آن در باکتری اشریشیاکلی با real-time و sdspage است.مواد و روش‌ها: جدایه‌های جنس استرپتومایسس از خلیج‌فارس جداسازی و توسط تست‌های بیوشیمیایی تعیین هویت شدند و سپس با روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز ژن ال آسپارژیناز از این استرپتومایسس‌ها جدا گردید. قطعه تکثیر یافته توسط روش ta کلونینگ به داخل وکتور بیانی ptg19 وارد شد. در مرحله بعد وکتور نوترکیب با روش شوک با cacl2 به باکتری اشریشیاکلی ترانسفورم شد و با استفاده از روش‌های رایج تائید کلونینگ انجام گردید.نتایج: نتایج این پژوهش نشان داد که استرپتومایسس‌های جداشده از خلیج‌فارس قادر به تولید آنزیم ال آسپارژیناز می‌باشند. درنهایت ژن این آنزیم توسط وکتور با موفقیت به باکتری اشریشیاکلی ترانسفورم شد و با بازدهی بالا، آنزیم ال آسپاراژیناز تولید نمود.نتیجه‌گیری: پیدا کردن سویه‌های باکتریایی جدید تولیدکننده آنزیم ال آسپاراژیناز و استفاده تکنیک مهندسی ژن می‌تواند منجر به عملکرد بهتر این آنزیم‌ها شود و به‌وسیله آن گام بزرگی در مسیر افزایش و سهولت تولید ال آسپاراژیناز در صنعت داروسازی برداشت.

Isolation and Purification of L-Asparaginase from Persian Gulf Streptomyces Isolates and Evaluation of It’s Cloned Gene Expression in Escherichia Coli by Real-Time and SDS-PAGE

Background Objective: Asparaginase enzymes are effective in treating lymphoblastic leukemia cancer. This enzyme is isolated from bacterial sources and commercially available as an anticancer drug. The aim of this study was to isolate and purifiy Lasparaginase from persian gulf Streptomyces isolates and evaluate its cloned gene expression in E. coli by RealTime and SDSPAGE.Materials methods: Streptomyces isolates were isolated from the Persian Gulf and identified by biochemical tests, then, Lasparaginase genes were isolated from streptomyces by PCR method. The amplified fragment was entered into vector pTG19 by the TA cloning technique. In the next step, the recombinant vector was transformed into E. coli using CaCl2 method and cloning confirmation using conventional methods.Result: The results of this study showed that Streptomyces isolates from the Persian Gulf were capable of producing Lasparaginase. Eventually, the gene of this enzyme was successfully transformed to E. coli by vector and produced high efficiency Lasparaginase.Conclusion: Finding new bacterial strains producing Lasparaginase and using gene engineering techniques can lead to better performance of these enzymes, thereby taking a big step in the direction of increasing and facilitating the production of Lasparaginase in the pharmaceutical industry.