طراحی کیت تشخیصی کلامیدیا تراکوماتیس در زنان علامت‌دار به روش real time pcr

زمینه و هدف: کلامیدیا تراکوماتیس یکی از شایع‌ترین علل عفونت‌های منتقلِ از راه جنسی در سراسر جهان است. غربالگری زنان برای عفونت‌های کلامیدیایی در کشورهای درحال‌توسعه به دلیل موثر نبودن روش‌های تشخیصی در دسترس، بسیار موردتوجه قرارگرفته است. هدف از انجام این تحقیق دستیابی به روشی است که تشخیص عفونت کلامیدیا تراکوماتیس را در زنان دارای علامت سهولت ببخشد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تعداد 50 نمونه بالینی (واژینال) از زنان علامت‌دار جمع‌آوری شد. پس از استخراج dna، توالی ژن omp1 به‌عنوان ژن منتخب از بانک ژن استخراج گردید. سپس، با استفاده از نرم‌افزار mega6 پرایمرهای اختصاصی طراحی گشت. با نمونه‌های dna استخراج‌شده pcr گذاشته شد و صحت پرایمرهای طراحی‌شده تائید شد. به‌منظور ساخت کنترل مثبت محصول pcr در وکتور، کلون شد. جهت تعیین حساسیت real time pcr، رقیق‌سازی dna از کنترل مثبت صورت گرفت و با رقت‌های مختلف real time pcr گذاشته شد و همچنین جهت تعیین اختصاصیت realtime pcr، dna باکتری‌های ناحیه واژن استخراج و realtime pcr انجام شد.نتایج: در این تحقیق توانستیم به‌وسیله تکنیک مولکولی پیشرفته realtime pcr کیتی طراحی کنیم که دارای 10 پیکوگرم حساسیت و 100 درصد اختصاصیت در تشخیص عفونت کلامیدیایی در زنان علامت‌دار است.نتیجه‌گیری: با پرایمرهای طراحی‌شده و روش ریل تایم می‌توان تشخیص 100 درصد نسبت به عفونت‌های کلامیدیا داشت.

Design of Chlamydia Trachomatis Diagnostic Kit in Symptomatic Women Using Real Time PCR

Background Objective: Chlamydia trachomatis is one of the most common sexually transmitted diseases worldwide. Screening women for Chlamydia trachomatis in developing countries is highly desirable due to the ineffectiveness of the available diagnostic methods. The aim of this study is to design a detection kit for Chlamydia trachomatis in symptomatic women.Materials Methods: A total of 50 clinical specimens of symptomatic women were collected. The OMP1 gene sequence was extracted from the gene bank and the primer and probe were designed appropriately by Mega6 software. The extracted DNA was amplified by PCR. In order to provide positive control, PCR product was cloned into Pjet1.2 vector. To determine the sensitivity, DNA dilution was performed. To determine the specificity, DNA of vaginal bacteria was extracted and Real Time PCR was done.Results: In this study, we designed a kits with 100% specificity and 10pg/ϥl sensitivity in detecting chlamydial infection in symptomatic women.Conclusion: With the use of designed primers and real time, we can detect 100% of chlamydia infections.