تاثیر ویتامین e بر القاء کلونی‌زایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی در محیط آزمایشگاه

زمینه و هدف: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی، سلول های زایای غیر متمایزی هستند که در طی مرحله پس از بلوغ با حفظ تعادل بین خود نوسازی و تمایز، سبب حفظ اسپرماتوژنز در طول حیات موجود می شوند. هدف از این مطالعه بررسی تاثیر غلظت های مختلف ویتامین e روی کلونی‌زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی است.مواد و روش‌ها: سلول های اسپرماتوگونی بیضه ی بره ی نابالغ طی دو مرحله هضم آنزیمی جدا و به روش حذف تمایزی تخلیص شدند. این سلول ها به چهار گروه تقسیم و به مدت 10 روز تحت تیمارهای مختلف قرار گرفتند. گروه شاهد (کشت ساده سلول های اسپرماتوگونی در محیط dmem حاوی 1 درصد آنتی بیوتیک و 5 درصد fbs که هیچ‌گونه تیماری را دریافت نکرد و گروه‌های 1، 2 و 3 که علاوه بر محیط بالا به ترتیب تحت تیمار با 20، 40 و 80 میکروگرم بر میلی لیتر ویتامین e قرار گرفتند. تعویض محیط کشت هر 72 ساعت انجام شد و تعداد و قطر کلونی های تشکیل‌شده در روزهای 4، 7 و 10 پس از کشت به‌وسیله‌ی میکروسکوپ معکوس بررسی گردید. شناسایی کلونی‌ها با استفاده از ایمنوسیتوشیمی آنتی‌ژن pgp9.5 تائید گردید.نتایج: میانگین تعداد و مساحت کلونی های اسپرماتوگونی در روزهای مختلف کشت در تیمارهای مختلف اختلاف معنی‌داری با گروه شاهد نداشت. میانگین مساحت کلونی‌ها در روز دهم به‌طور معنی‌داری بیشتر از روز چهارم بود (p<0/05).نتیجه‌گیری: نتایج حاصل از این مطالعه نشان می‌دهد که افزودن ویتامین e به‌عنوان آنتی‌اکسیدان احتمالاً نقش چشمگیری در القا کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در کشت کوتاه‌مدت در محیط آزمایشگاه ندارد.

Effect of Vitamin E on Induction of Colonization of Spermatogonial Stem Cells in Vitro

Background Objective: Spermatogonial stem cells (SSCs) are undifferentiated germ cells that maintain spermatogenesis during lifetime by balancing between selfrenewal and differentiation. The aim of this study was to investigate the effect of different concentrations of vitamin E on spermatogonial stem cells colony formation.Material Methods: SSCs were isolated from testes of prepubertal lamb by two step enzymatic digestions then purified by differential pllating. The cells were cultured for 10 days in 4 groups. Control group: Basic media (DMEM environment which contains 1% antibiotic and 5% FBS( and treatment groups were treated with 20, 40 and 80 micro;mol/ml vitamin E added to basic media respectively. Changing of culture media was performed every 72h. Colony number and diameter assay was done by inverted microscope. Identification of SSCs was performed by immunocytochemistry assay against PGP9.5.Results: there were no significant difference in colony number and surface area between treatment groups and between treatment and control groups in days 4, 7and 10. Colony surface area was significantly increased at day 10 compared to day 4 (P<0.05).Conclusion: The results of this study showed vitamin E as an antioxidant doesn rsquo;t have significant effect on colony induction of SSCs in short term culture in vitro.