تشخیص کلستریدیوم دیفیسیل و بررسی توکسین‌های a و b از مبتلایان به اسهال مزمن با روش‌های کشت و pcr

زمینه و هدف: کلستریدیوم دیفیسیل باسیل گرم مثبت، بی‌هوازی اجباری است. تشخیص دقیق و سریع یکی از مسائل مهم در کنترل عفونت کلستریدیوم دیفیسیل است. مطالعه حاضر باهدف مقایسه دو روش کشت و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در تشخیص کلستریدیوم دیفیسیل از بیماران مبتلابه اسهال و بررسی توکسین‌های a و b در این نمونه‌ها است.مواد و روش‌ها: 68 نمونه از بیماران بستری در بیمارستان‌های قم جمع‌آوری گردید. همه نمونه ها به‌سرعت روی محیط ccfa کشت و در شرایط بی‌هوازی گرما گذاری شدند. پس‌ازاین اقدامات، باکتری‌های موردنظر جهت استخراج dna و سپس انجام pcr بر روی ژن cdd3جهت تشخیص قطعی باکتری به کار گرفته شد؛ محصول pcr آن 622bp است و برای توکسین‌های a و b بایستی قطعاتی با طول 473 و 272 جفت باز گرفته شود.نتایج: مورفولوژی پرگنه‌ های کلستریدیوم دیفیسیل بر روی محیط های مختلف بسیار متفاوت است. از مجموع 68 نمونه مدفوع استفاده‌شده، 11 کشت مثبت به دست آمد. 16 ایزوله کلستریدیوم دیفیسیل ازنظر ژن cdd3 مثبت بودند که در 6 مورد دارای هر دو توکسین و 4 مورد دارای توکسین a و 3 مورد توکسین b را برای اساس ژن‌های مورد انتظار دارا بودند.نتیجه‌گیری: روش سیتوتوکسیتی به‌عنوان روش gold standard برای این باکتری است. به‌منظور پیشگیری از شیوع بالای این باکتری، استفاده از روش‌های شناسایی بسیار مهم است که تکنیک pcr در مقایسه با روش‌های کشت روشی مناسب برای تشخیص سریع باکتری کلستریدیوم دیفیسیل است این روش در زمان کمتری انجام‌شده و همچنین از اختصاصیت بالایی برخورداراست.

Detection of Clostridium difficile associated diarrhea in disease based on Polymerase chain reaction and bacterial culture And toxin A, B frequency

Detection of Clostridium Difficile Associated Diarrhea in Disease Based on Polymerase Chain Reaction and Bacterial Culture and Toxin A, B FrequencyDetection of Clostridium Difficile Associated Diarrhea in DiseaseBackground Objective: Clostridium difficile is an obligate anaerobic, gram positive bacillus. The purpose of this study was to comparison between PCR technique and bacterial culture for assessing the prevalence of Clostridium difficile infection in the samples of watery diarrhea.Materials methods: This crosssectional qualitative study was performed in 68 samples of watery diarrhea in Qom province hospitals. All samples were cultured in the specialized CCFA Agar medium. Specific primers were applied for the PCR Assay based on cdd3 gene. Based on this primer PCR product for this gene must be 622bp.toxin A B diagnosis based on specific primers and product must be 473 and 272 bpResults: In this study, the optimized PCR technique was determined to be bacterium in 16 samples. But bacteria diagnosis in 11 samples by culture method. 6 samples have toxin A and B, 4samples has toxin A and 3 samples has toxin B.Conclusion: Cytotoxicity method is gold standard for clostridium difficile. Diagnosis of these bacteria is very important and PCR was found as an applicable, sensitive, and quick technique for detection of Clostridium difficile in compromise culture medium method.