همسانه سازی، بررسی بیان و تخلیص ژن کد کننده پروتئین نوترکیب متشکل از زیرواحدهای اتصالی آنتی‌ژن‌های سطحی cs1 و cs2 از اشرشیا‌‌ کلی انتروتوکسیژنیک (etec)

زمینه و هدف: باکتری اشرشیا کلی انتروتوکسیژنیک از عوامل شایع اسهال است. فاکتورهای کلونیزاسیون و انتروتوکسین ها از عوامل اصلی حدت زا در این ارگانیسم هستند. باکتری مذکور از طریق فاکتورهای کلونیزاسیون به سطح سلول های اپیتلیال روده متصل می شود و انتروتوکسین ها را تولید می کند که این سموم باعث ترشح بیش ازحد مایعات و الکترولیت ها در لومن روده می شوند که درنهایت منجر به اسهال می گردند. به دلیل درمان مشکل و شیوع بالای این بیماری طراحی واکسن علیه این ارگانیسم یکی از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. پروتئین cood ndash; cotd به عنوان زیر واحدهای راسی cs1 و cs2 نقش مهمی را در اتصال باکتری به سلول های اپیتلیال روده ایفا می کنند. در این مطالعه بیان و تخلیص ژن کد کننده پروتئین کایمریک cood ndash; cotd به عنوان کاندیدای واکسن های زیرواحدی انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه ، بهینه سازی کدونی ژن کایمریک cood ndash; cotd با نرم افزار gene designer انجام شد. ژن موردنظر با روش pcr تکثیر و در وکتور کلونینگpjet1.2/blunt همسانه سازی گردید و به منظور بیان در وکتور بیانیpet28a زیرهمسانه سازی شد. پروتئین با روش کروماتوگرافی نیکل تخلیص و با وسترن بلات ارزیابی شد.نتایج: حضور باند 82 کیلودالتونی در ژل sdspage 10 درصد بیان پروتئین کایمریک cood ndash; cotd را نشان داد که با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان پروتئین تخلیص شده در این تحقیق 121 میکروگرم در میلی لیتر بود.نتیجه گیری: مطالعات بیان و تخلیص پروتئین نشان داد که این پروتئین دارای بیان در میزبان همولوگ است.