کلونینگ و بیان نواحی آنتیژنیک ژن Caga هلیکوباکتر پیلوری در باکتری اشرشیاکلی

زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین پاتوژن گوارشی است که نیمی از مردم دنیا را آلوده ساخته و مهمترین علت بیماریهای معدهایرودهای از جمله گاستریک مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است. ژن caga )سیتوتوکسین مرتبط با ژن a ( یکی از مهمترین شاخصهای بیماری زای این باکتری است. هدف از این تحقیق ساخت ناقل نوترکیب حامل نواحی آنتیژنیک ژن caga و بیان آن در میزبان بیانی میباشد.مواد و روشها: برای رسیدن به این هدف بر اساس برنامههای بیوانفورماتیکی ناحیهای از ژن caga که دارای بالاترین خاصیت آنتیژنیک بود شناسایی شده و بر اساس آن قطعهای به طول 996 جفت باز با استفاده از روش pcr تکثیر شد. این قطعه با استفاده از هضم آنزیمی در ناقل pet32a کلون و سپس به داخل باکتری e.coli سویه bl2i(de3) ترنسفورم و بیان گردید.نتایج: نتایج توالی یابی کلونینگ موفق ژن caga را در حامل بیانی نشان داد. وزن مولکولی پروتئین نوترکیب تولید شده بر روی ژل sds-page ، 57 کیلو دالتون بر آورد شد و صحت بیان پروتئین تایید گردید.نتیجه گیری: بر اساس نتایج این مطالعه کلونینگ ناحیه اپی توپی مورد نظر با موفقیت انجام شده و احتمالا میتوان پروتئین نو ترکیب به دست آمده را به عنوان کاندیدای مناسبی برای تولید igy حاصل از مرغهای ایمن شده برای کنترل عفونت هلیکوباکتر پیلوری در انسان، طراحی کیتهای تشخیصی و تولید واکسن هلیکوباکترپیلوری معرفی نمود .

Cloning and Expression of Helicobacter Pylori CagA Gene Antigenic Regions in E. coli

Background Objective: Helicobacter pylori, which has infected about 50 percent of the world population, is one of the most common gastrointestinal pathogens and the most prevalent cause of gastrointestinal diseases, such as chronic gastric ulcers, gastric and duodenal ulcers, gastric cancer and lymphoma. The CagA Gene (cytotoxinassociated gene A) is a major virulence factor of this pathogenic bacterium. The aim of this study was to construct a recombinant vector carrying the antigenic regions of CagA gene and also to express this gene.Material methods: The major epitopes of the CagA gene were identified based on bioinformatics. Through this procedure, a gene fragment of 996 bp was isolated by PCR, inserted into a pET32a vector using the enzymatic digestion and then transformed into the E. coli strain BL2I (DE3).Results: The results of sequencing represented the successful cloning of the CagA gene in the expression vector and introducing the accessibility to the antigen. The molecular weight of the produced recombinant protein was estimated 57 KD on an SDSPAGE gel and the accuracy of the protein expression was verified.Conclusions: The results of this study proved the successful cloning of the epitope area. The recombinant protein can probably be introduced as a good candidate for the production of IgY from the chickenimmunized and the control of Helicobacter pylori infection in humans. It could also be possibly used for the design of diagnostic kits and vaccines for Helicobacter pylori