کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین b باکتری استافیلوکوکوس اورئوس

زمینه و هدف: باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین های متعدد باعث بیماری های مختلف می شود، به همین دلیل روش های موثر و آسان شناسایی انتروتوکسین ها موردنیاز است. امروزه غالباً از روش های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی بادی های مونوکلونال استفاده می شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی بادی های زنجیره سنگین یافت شده که vhh یا نانوبادی نامیده می شوند. خصوصیات منحصربه فرد این آنتی بادی ها از قبیل اتصال به مولکول های کوچک نظیر توکسین ها، آن ها را کاندیدهای جذابی برای توسعه ترکیبات دارویی نموده است. برای دستیابی به مولکول vhh علیه انتروتوکسین b استافیلوکوکوس تحقیق حاضر انجام شده است.مواد و روش ها: غنی سازی کتابخانه ی فاژی به منظور جداسازی نانوبادی های اختصاصی علیه توکسین در کارهای قبل انجام شده بود. در ادامه وکتور pcantab 5e حاوی vhh از باکتری e.coli سویه xl1blue، استخراج و پس از انجام واکنش pcr با پرایمرهای مربوطه، ساب کلونینگ در وکتور بیانی (+)pet21a با مکان های برش ndei و xhoi صورت گرفت. ترانسفورماسیون وکتور درون باکتری e.coli سویه بیانی (de3) bl2i انجام شد. سپس سلول ها تحت القای iptg قرار گرفتند و زمان و شرایط تولید بهینه گردید، درنهایت بیان پروتئین توسط تکنیک sdspage و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: برای تایید کلونینگ ژن نانوبادی درون وکتور pet21a(+)، توالی نوکلئوتیدی ژن آنالیز و ترانسفورم به باکتری e.coli سویه de3))bl21 با موفقیت انجام شد. پس از القاء، پروتئین فعال درون سلول توسط روش sdspage مشاهده و توسط لکه گذاری وسترن تایید شد.نتیجه گیری: در این تحقیق کلونینگ، ساب کلونینگ و بیان ژن نانوبادی انجام شد. تولید این پروتئین نوترکیب می تواند گامی مهم در جهت توسعه روش های درمانی جدید و یا تولید واکسن علیه انتروتوکسین b باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بردارد.