بررسی چند شکلی اگزون دو ژن bola-drb3 در جمعیت گاومیش استان خوزستان با استفاده از روش pcr-rflp

جایگاه ژنی مجموعه سازگاری بافت (mhc) کد کننده آنتی ژن ها و پروتئین های سطح لوکوسیت ها است که در واکنش های دفاعی بدن و شناسایی پروتئین های خارجی نقش دارند. در گاو این جایگاه ژنی به نام بولا معروف است که در سه دسته ژنی به نام های کلاسі ، کلاس ііو کلاس ііі بر روی بازوی کوتاه کروموزوم 23 گاو ترتیب یافته اند، هر یک از این کلاس های ژنی دارای مجموعه جایگاه های ژنی متعدد و مختلف است و هر جایگاه می تواند تا بیش از ده ها آلل را شامل شود . هدف از این پژوهش، بررسی چندشکلی اگزون 2 جایگاه ژنی bola-drb3 در جمعیت گاومیش استان خوزستان است. در این پژوهش از روش پی.سی.آر دو مرحله ای (heminested-pcr) برای تکثیر این اگزون استفاده شد. خونگیری از 80 راس گاومیش از شهرستان های استان صورت گرفت. واکنش دو مرحله ای زنجیر ه ای پلیمراز جهت تکثیر قطعه 284 جفت بازی از اگزون 2 ژن mhc با استفاده از آغازگرهای اختصاصی این ژن انجام شد. قطعه تکثیر شده به وسیله آنزیم های برشیiiihae و rsaі مورد تیمار قرار گرفت. نتایج حاصل از این پژوهش با استفاده از آنزیم برشیiiihae، نه الگوی برشی را در این جایگاه ژنی نشان داد که الگوهای برشی aوb به ترتیب با فراوانی 34/37 و 23/75 درصد بیشترین فراوانی آللی را به خود اختصاص دادند و 17 ترکیب ژنتیکی شناسایی شد. آنزیم برشی rsaі، تعداد ده الگوی برشی را نشان داد که الگوهای برشی g وb به ترتیب با فراوانی 30 و 20 درصد بیشترین فراوانی آللی را به خود اختصاص دادند با استفاده از این آنزیم نیز 17 ترکیب ژنتیک شناسایی شد . آزمون کای مربع نشان داد که جمعیت مورد بررسی، در حالت تعادل هاردیوینبرگ قرار دارد . در پژوهش حاضر سطح بسیار بالایی از پلی مورفیسم در جمعیت گاومیش استان خوزستان مشاهده شد.

Investigation of bovine lymphocyte antigen (BoLA-DRB3) by PCR-based RFLP in buffalo population of Khuzestan province

MHC locus codes antigens and leukocyte surface proteins which have roles on immune reactions and identification of foreign proteins. In cattle this locus is known as Bulla and is composed of three classes of genes: CLASS І, CLASS ІІ and CLASS ІІІ and is located on short arm chromosome 23. Each of these classes of genes has complex and various genes and each gene may have dozens of alleles. The objective of this study was to study the variation of exon 2 of locus BoLADRB3 in buffalo population in Khuzestan province. In this study, the HeminestedPCR method was used to amplifing this exon. In order to determain the level of polymorphism, blood sample were collected from 80 buffalos in Shadegan, Ahwaz, Dashte azadegan, Dezfoul and Shoshtar cities. DNA extraction and exon 2 of the MHC gene was amplified by specific set of primers for this gene to produce a 284 bp fragment. The amplified fragments were digested with HaeIII and RsaІ restriction endonuclease. Digested products were separated and were stained by vertical electrophoresis on 8% Polyacrylamide gel. After digestion with HaeIII and RsaІ nine and ten alleles (restriction digestion pattern) were obtained at this locus respectively. Alleles a and b with 34.37 and 23.75 percent were the most frequent alleles when digested with HaeIII and alleles a and b with 20 and 30 percent frequency were the frequent alleles when digested with RsaІ. We identified 17 genotypes using each of the restriction enzymes in this population.