کشت بافت و تراریزش نارنج (citrus aurantium) با استفاده از ژن کد کننده ی پوشش پروتئینی ویروس تریستزای مرکبات (ctv)

در این پژوهش به منظور به دست آوردن گیاهان تراریخته ی نارنج، از ریزنمونه های اپی کوتیل و هیپوکوتیل نارنج استفاده و بهبود اندام زایی مستقیم و تولید شاخساره در ریزنمونه ها با استفاده از تیمارهای مختلف بررسی شدند. تراریزش از طریق همکشتی ریزنمونه ها با agrobacterium tumefaciens سویه eha 105 حامل وکتور pfgc 5941 و ژن کد کننده ی پوشش پروتئینی ویروس تریستزای مرکبات (ctv) انجام شده. پس از تراریزش، ریزنمونه هابه محیط کشت انتخابی حاوی علف کش بستا با ترکیبی از سطوح تنظیم کننده رشد bap(0، 1 و 2 میلی گرم در لیتر) و naa (0، 0/25 و 0/5) منتقل شدند. اثر زخم زدن بر اندام زایی مستقیم و تولید شاخساره و اثر استفاده از وکیوم بر کارایی تراریزش، بررسی شدند. تایید تراریخته بودن شاخساره ها در محیط انتخابی حاوی علف کش بستا و انجام واکنش پی.سی.آر با ژن های اختصاصی صورت گرفت. بهترین کارایی اندام زایی یا تولید شاخساره (57 درصد) با استفاده از ترکیب تنظیم کننده های رشد به میزان 2 میلی گرم در لیتر bap و0/25 میلی گرم در لیتر naa حاصل شد ضمن این که، زخم زدن اثر معنی داری بر تولید شاخساره نداشت. بالاترین میزان شاخساره های تراریخته به میزان11/25درصد در تیمار وکیوم به دست آمد. در نهایت شاخساره های تراریخته بر روی دانهال های رشد یافته در شرایط in vitro ریزپیوند شدند.

Direct organogenesis and transformation of sour orange (Citrus aurantium) using citrus tristeza virus (CTV) coat protein coding gene

In this study transgenic plants of sour orange (C. aurantium) that is an important citrus rootstock were produced by Agrobacteriummediated transformation. Epicotyl and hypocotyl segmentsderived explants were cocultured with Agrobacterium strain EHA105 carrying pFGC5941 plasmid containsing CTV coat protein (p25) gene. One of the main objects of present research was to improve the direct in vitro organogenesis efficiency in C. aurantium. Therefore different combination of BAP (0, 1, 2 mg/L) and NAA (0, 0.25, 0.5 mg/L) were used in selective medium to culture transformed explants. The highest regeneration (57%) was obtained from explant treated with 2 mg/L BAP and 0.25 mg/L NAA. Effects of wounding and vacuum infiltration on transformation efficiency were evaluated either. The best transformation efficiency (11.25%) was obtained from explants that were vacuum infiltrated during transformation and subsequently were cultured in medium containing 2 mg/L BAP and 0.25 mg/L NAA. PCR analysis using two different genes were performed to confirm transformation. Micro grafting of transformed shoots were carried out on nontransgenic, invitro grown seedlings.