تعیین توالی و بررسی خصوصیات مولکولی ژن بتا 1 و 4 اندوگلوکاناز سویه bacillus subtilis b5d

این پژوهش به منظور تعیین برخی ویژگی های کاتالیتیکی و خصوصیات مولکولی ژن کدکننده آنزیم بتا 1و4 اندوگلوکاناز در سویهbacillus subtilis b5d انجام شد. ژن کدکننده این آنزیم در سویه b5d توسط آغازگرهای اختصاصی تکثیر، تعیین توالی و در پایگاه اطلاعاتی ncbi ثبت شد. تجزیه توالی حاصله و رسم درخت فیلوژنی با استفاده از نرم افزار vector nti و mega.4 انجام شد. براساس نتایج حاصله قطعه تعیین توالی شده شامل 794 نوکلئوتید بود که یک رشته پپتیدی با 264 اسیدآمینه را کد می کند. تجزیه توالی آمینواسیدی این ژن در سویه مورد بررسی نشان داد که آنزیم اندوبتاگلوکاناز تولید شده توسط سویه مورد پژوهش چندبخشی بوده که قسمت باند شونده به سلولز (cellulose binding domain, cbd) آن مربوط به خانواده گلیکوزیدهیدرولاز 3 و قسمت کاتالیک (cd) آنزیم مورد بررسی متعلق به خانواده گلیکوزیدهیدرولاز 5 است. همچنین فعالیت آنزیم بتا 1و4 اندوگلوکاناز تولید شده توسط سویه b5d، در محدوده دمایی 7030 درجه سانتی گراد و ph 6/4 مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که بیشترین فعالیت کاتالیتیک آنزیم بتا 1و4 اندوگلوکاناز در دمای 55 درجه سانتی گراد بوده که u/l 83/461 برآورد شد. بررسی پایداری آنزیم در شرایط دمایی و ph های مختلف نشان داد که تا دمای 60 درجه سانتی گراد و در محدوده ph 105 آنزیم پایداری بهتری دارد

Nucleotide sequence and molecular characterization of β-1,4-endoglucanase gene from Bacillus subtilis strain B5d

the present investigation was conducted to characterize enzymatic and molecular aspects of a beta 1 and 4 endoglucanase gene in Bacillus subtilis strain B5d.The gene was amplified with specific primers and its sequence was deposited in the NCBI (accession number ofKF670724). Sequence and phylogenetic analyses were performed using the Vector NTI and Mega 4 software. The PCR product comprised of 794 bp, encoding a peptid of 264 amino acids in length. Amino acid sequence analysis showed that the gene encoding beta 1 and 4 endoglucanase in B. subtilis B5d had multiple domains including cellulose binding domain belongs to family 3 and catalytic domain belong to glycoside hydrolase family 5.The enzyme activity was assessed in temperature range of 3070 deg;C and pH 4.6. The results showed that the maximum catalytic activity of the enzyme occurred at 55 deg;C and was estimated at 461.83 U/L. The stability of the enzyme was measured at different pH and temperatures values and the results showed that the enzyme was stable at pH 510 and temperature values up 60 deg;C.