تشخیص مولکولی ذرت‌های تراریخته براساس پیشبر P35s

در دو دهه ی اخیر مهندسی ژنتیک با استفاده از علم بیوتکنولوژی باعث تولید محصولات تراریخته در جهان شده است. آمار رو به رشد سطح کشت محصولات تراریخته در سرتاسر دنیا حاکی از اهمیت ویژه ی تراریخته ها و افزایش استفاده ی عموم مردم از این مواد غذایی است. ذرت یکی از مهمترین محصولات تراریخته است که در بسیاری از کشورها به میزان زیادی کشت و مصرف می شود. هدف از این پژوهش شناسایی ذرت های تراریخته با استفاده از روش مولکولی حساس و اختصاصی واکنش زنجیره ای پلیمراز (پی.سی.آر) است که قابلیت جداسازی موادغذایی تراریخته از غیرتراریخته را دارا است. این پژوهش انجام شده با هدف تشخیص ذرت های تراریخته در سبدکالای مصرف کنندگان ایرانی بر پایه ی (پی.سی.آر) و آغازگر اختصاصی p35s است. در پژوهش های پیشین در ایران چند نمونه ذرت مشخص یا وارداتی در ایران مورد بررسی قرار گرفته بود. در این پژوهش سه نمونه ی تراریخته ذرت از گمرک شیراز تهیه و دی.ان.اِ سی و هفت نمونه ی ذرت جمع آوری شده از بازارمصرف هفت شهر بزرگ و شش نمونه ذرت جهادکشاورزی، به روش استانداردctab (ستیل تری متیل آمونیوم بروماید) استخراج شد. آزمون پی.سی.آر شناسایی ذرت با استفاده از ژن بومی اینورتازivr) که در تمام ارقام ذرت وجود دارد) انجام شد. جهت شناسایی ذرت های تراریخته آزمون پی.سی.آر براساس پیشبر p35s (آغازگر اختصاصی camv 35s موجود اکثر وکتورها (با آغازگرهای اختصاصی p35s2 و p35s1 بهینه شد. محصولivr و p35s جهت تعیین توالی و تهیه کنترل مثبت کلون شد. آزمون پی.سی.آر ژن ivr و پیشبرp35s بر روی نمونه ها بهینه سازی و آمپلیکون 226 bp و 195 bp به ترتیب تکثیر شد. هر دو محصول پی.سی.آر به روش t/a cloning و با استفاده از پلاسمیدptz57r و میزبانjm107e.coli کلون شد. از میان چهل و شش نمونه ذرت جمع آوری شده از بازارمصرف، گمرک و جهادکشاورزی 100 درصد به لحاظ ژن بومی اینورتاز و 56.5 درصد (26 عدد) از نمونه ها به لحاظ اگزوژن p35s دارای جواب مثبت بودند. این پژوهش نشان می دهد که درصدبالایی از ذرت های مصرفی در بازار ایران براساس واکنش زنجیره ای پلیمراز تراریخته است. با این وجود هیچ اقدامی جهت برچسب گذاری و آگاهی مصرف کننده صورت نگرفته است.

PCR detection of transgenic maize in Iran on the basis of P35S

in the past two decades, biotechnology in genetic engineering has led the production of genetically modified organisms (GMOs) all around the world. The statistics of GMO cultivation has lightened the significant importance of GMOs worldwide, and shows that they are widely consumed by public. Maize is one of the most important transgenic crops which has widely cultivated and consumed in many countries. The aim of this study is the detection of genetically modified maize in Iran markets. First, three samples of transgenic maize were prepared from Shiraz rsquo;s Custom and their DNA was extracted using Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) method. The control PCR test of native maize was performed on Invertase (IVR) gene which is present in all corn types. For detection of genetically modified maize, the PCR test based on P35S promoter which present in most transformation vectors was optimized using specific primers (P35S1 and P35S2). Then, DNA of 37 maize samples collected from seven major cities of Iran and six maize samples from Jihad Agriculture Organization were extracted. PCR tests for the IVR gene and P35S were performed. Respectively, the 226 bp and the 195 bp amplicons were amplified. PCR products were cloned by T/A cloning in JM107 using pTZ57R plasmid for sequencing and preparing the positive controls. 46 samples collected from the market, Customs and Jihad Agriculture Organization were shown to be 100% positive for the native IVR gene and 56.5% (26 samples) positive for the exogenous P35S. This study showed that a high percentage of transgenic maize is present in Iran rsquo;s consumption market. However, no action has been taken toward labeling and the consumer awareness of these food products.