بهینه‌سازی بیان موقت ژن به واسطه آگروباکتریوم در بادام

از آنجاکه انتقال دایم ژن و تولید گیاه تراریخته به ویژه در گیاهان چند ساله مانند بادام لازمه ی صرف وقت و هزینه است، بهینه سازی عوامل مختلف اثر گذار در تراریزش گیاهان، مورد توجه قرار می گیرد. بیان موقت ژن با استفاده از اگروباکتریوم (اگرواینفیلتریشن) یک راهکار مفید برای بررسی عملکرد ژن در سیستم های بیانی متفاوت است. از آنجاکه بهینه کردن فاکتورهای موثر در روش های تراریزش لازمه برنامه های انتقال ژن است، این پژوهش با هدف توسعه یک سیستم کارآمد برای بیان موقت به واسطه اگروباکتریوم در برگ های بادام، جهت پیش بینی سریع عملکرد سیستم های تظاهر و پروتئین نوترکیب در بادام انجام شد. ژن گزارشگر لیکیناز برای ارزیابی عواملی که سطح بیان موقت را تحت تاثیر قرار می دهند، به کار برده شد. مزیت اصلی استفاده از این ژن، سادگی کار، حساسیت بالا و ایمنی زیستی آن است. سه سیستم تظاهر مختلف حامل ژن لیکیناز، که تحت تاثیر عناصر تنظیمی متفاوت قرار داشتند به واسطه دو سویه اگروباکتریوم lba4404 و gv3501 با استفاده از سرنگ بدون سوزن به برگ های رقم های مامایی و شاهرود 12 بادام انتقال داده شد. بعد از سه روز میزان پروتئین فعال اندازه گیری شد. آزمون های آماری نشان داد که بیشترین میزان تولید پروتئین در برگ های رقم مامایی با استفاده از سیستم تظاهری که موجب تجمع پروتئین در شبکه آندوپلاسمی می شود، با کاربرد سویه lba4404 به دست می آید. از این رو سیستم تظاهر مربوطه و سویه باکتری lba4404 و رقم مامایی بادام جهت دستیابی به بادام تراریخته پیشنهاد می شود.

Optimization of transient expression by Agrobacterium in almond

since permanent transfer of genes and transgenic plant production, particularly in perennial plants such as almonds are time and cost consuming, optimization of various factors affecting the transgenic plants is critical. Transient genetic expression using Agrobacterium (Agroinfiltration) in plant is a useful tool to study gene function indifferent gene expression systems. Since optimization of factors that could affect the transgenic methods is necessary for gene transfer programs, Because This study was aimed at developing an efficient system for transient expression via Agrobacterium in almond leaves for rapid prediction of systems performance. Here the lichenasereporter gene was usedto assessthe parametersinfluencing thelevel oftransient expression. The main advantagesof using thisgene includeeasy operation, high sensitivity and biosafety. Three different constructs carrying lichenase gene and differentregulatoryelementswereinfiltrated intoleaves ofmamaei and shahrood 12cultivars,by two Agrobacteriumstrain, LBA4404 andGV3501,using syringewithoutneedle.After threedays,the amount of active proteinwas measured. Statistical analysis showedthat the highestamount ofprotein was obtainedin theleavesof mamaei cultivar transformedby theexpression systemcausing accumulation ofproteins in theendoplasmic reticulum by LBA4404 strain. So forrapidproduction ofrecombinant protein in Almond, theagroinfiltration method by using the related expression system, LBA4404 strain and mamaei cultivar, isrecommended.