بررسی اثر سازگاری سویه در بیان موقت مبتنی بر روش اگروباکتریوم در ارقام خربزه (cucumis melo l.)

بیان موقت یک ژن اثرگذار در بیماری زایی (effector) در گیاه میزبان با استفاده از اگرواینجکشن، یک روش قابل قبول برای بررسی نقش ژن در بیماری زایی است. در این مطالعه تاثیر دو سویه اگروباکتریوم بر چهار رقم استاندارد و دو رقم محلی خربزه در بررسی بیان موقت مورد ارزیابی قرار گرفت. سازگاری سویه های lba4404 و gv3101 به وسیله تزریق سلولهای باکتری به برگ ارقام خربزه تعیین شد. زنده مانی سلول های اگروباکتریوم تزریق شده در بافت برگ به وسیله ارزیابی بیان پروکاریوتی ژن gus 24 ساعت پس از تزریق تعیین شد. سویه lba4404 پس از انتقال ناقل pcambia3301 دارای ژن gus اینترون دار به عنوان کنترل مثبت برای تایید بیان موقت این ژن در سلول های گیاه استفاده شد. انتقال ناقل های pbi121 و pcambia3301 به سویه lba4404 با روش کلنی pcr با آغازگر های psh3f/r تایید شد. راندمان بیان موقت در برگ های ارقام خربزه، 48 ساعت پس از اگرواینجکشن سویه lba4404 حامل ناقل pcambia3301 به وسیله سنجش هیستوشیمیایی ژن gus مشخص شد. برگ های تزریق شده با سویه lba4404 دارای ناقل pbi121 فعالیت ژن gus را نشان دادند که تایید کننده زنده بودن سلول های اگروباکتریوم در برگ ارقام خربزه بود. تمام ارقام ژن gus را به صورت موقت با استفاده از اگرواینجکشن پس از گذشت 24 ساعت بیان کردند. این نتایج می تواند در مطالعات آینده به منظور بررسی عملکرد ژن های اثرگذار منتخب در برهمکنش با ارقام استاندارد خربزه مورد استفاده قرار گیرد.

Evaluation of strain compatibility effects on Agrobacterium-mediated transient GUS expression in melon cultivars

transient expression of a candidate effector gene in host plants following Agroinfiltration is a useful method to investigate the role of the gene in pathogenecity. In this study, the effects of two Agrobacterium tumefaciens strains on four standard melon lines and two Iranian melon cultivars were investigated to establish transient expression in melon. Compatibility of the LBA4404 and GV3101 strains was defined by injection of the bacterial suspensions into the leaves of cultivars. Viability of the injected Agrobacterium strain cells in leaf tissues was evaluated 24 hours after injection by prokaryotic GUS reporter gene assay. The LBA4404 strain harboring the pCAMBIA3301 vector containing an intronGUS reporter gene was used to confirm eukaryotic GUS expression in the plant cells. The LBA4404 strain was transformed by the pBI121 and pCAMBIA3301 expression vectors and transient transformation was confirmed by colony PCR technique using the PSh3F/R primers. The efficiency of transient transformation of the melon leaves was evaluated 48 hours after Agroinjection of the LBA4404 strain containing pCAMBIA3301 by the histochemical GUS assay. The leaves that were injected by LBA4404 harboring pBI121 showed GUS activity. All the melon cultivars transiently expressed the GUS reporter gene 24 hours after Agroinjection. These findings could be used in the future studies to evaluate function of candidate effector genes in interaction with standard melon lines.