انتقال ژن آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت b به گیاه توتون

یکی از شایع ترین آلودگی های ویروسی انسانی در سراسر جهان آلودگی ویروس هپاتیت b است. موثرترین شیوه برای کنترل و درمان این بیماری، تزریق واکسن می باشد، اما با توجه به گران بودن داروهای شیمیایی، تولید پروتئین نوترکیب ویروس هپاتیت b به عنوان واکسن خوراکی در گیاهان طی چند سال گذشته با بیورآکتور های مناسب برای تولید ارزان و فراوان اهمیت یافته است. بنابراین در این پژوهش سعی شده است که ژن hbsag با کمترین هزینه به گیاه مدل توتون منتقل شود. بدین منظور ابتدا ناقل دوگانهpcambia 1304 حاوی ژن hbsag در باکتری escherichia coli سویهjm107 و اگروباکتریوم سویه lba4404 کلون و به روش قطعات برگی به گیاه توتون منتقل شد. باززایی ریزنمونه های تلقیح شده در محیط کشت انتخابی ms حاوی 500 میلی گرم در لیتر سفوتاکسیم و 15 میلی گرم در لیتر هیگرومایسین و همچنین تنظیم کننده های رشد در غلظت های یک میلی گرم در لیتر bap و یک دهم میلی گرم در لیتر naa انجام گرفت. در آخر پس از رسیدن گیاهچه های غربال شده به ارتفاع 15 سانتیمتر، به روش ctab از گیاهان تراریخته احتمالی dna استخراج شد و جهت شناسایی و تایید حضور ژن با آغازگرهای اختصاصی واکنش pcr و جهت بررسی بیان ژن واکنش rt-pcr انجام گرفت و بدین ترتیب حضور و بیان این ژن در گیاهان تراریخته توتون تایید شد

Transformation of Hepatitis B Virus surface antigen (HBsAg) gene into Tobacco plants

Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the most widespread viral infections of humans. An effective way to treat and prevent the disease is vaccination. Since production of conventional HBV vaccines is very expensive, use of transgenic plants as an alternative bioreactor has recently become of interest to many researchers. In this study, the HBsAg gene has been transferred to pepper plants (Nicotiana tabacum) through the leaf disk technique. The recombinant plant expression vector, pCAMBIA containing HBsAg was cloned into E. coli strain JM107 and was then introduced into Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404. Young tobacco leaves were used as explants and cocultivated with A. tumefaciens. The transformants were regenerated on selection medium containing 1mg.l1 BAP, 0/1mg.l1 NAA, 500 mg.l1 cephotaxim and 15 mg.l1 hygromycin. After the growth of plantlets (about 15 cm), genomic DNA was extracted from putatively regenerated plants by the CTAB method. The presence of HBsAg gene in transgenic plants was detected using PCR analysis. Finally expression of HBsAg gene was tested via RTPCR analysis.