روش ارزیابی فعالیت مهارکننده های خاموشی ژن در گیاه با استفاده از دو پروتئین از ویروس برگ بادبزنی مو (gflv)

مهارکننده های rna silencing در گیاهان، جانوران و بیشتر ویروس های بیماری زای گیاهی به خوبی توصیف شده اند و نیز شیوه شناسایی فعالیت مهارکنندگی خاموشی ژن یک پروتئین در سیستم گیاهی راه اندازی شده است. ویروس برگ بادبزنی مو (gflv) grapevine fanleaf virus یکی از شایع ترین ویروس های شناخته شده مو در سراسر دنیا است که تا 80 درصد خسارت می زند. این ویروس دوپیکره ای با ژنوم rna تک رشته ای در جنس nepovirus و خانواده secoviridae قرار دارد. ژن مهارکننده خاموشی در نپوویروس ها هنوز شناسایی نشده است و دانش ما از تعیین کننده های علایم و مهارکننده های خاموشی ویروس های این جنس خیلی محدود است. در این پژوهش ژن gfp در گیاهان nicotiana benthamiana تراریخته با gfp خاموش شد و سپس توانایی پروتئین های پلیمراز (rdrp) و حرکتی gflv در مهار سازوکار rna silencing ارزیابی شد. عملکرد این دو پروتئین با شاهدهای مثبت و منفی به کاربرده شده مقایسه شد و نتایج نشان داد که اگرچه این دو پروتئین در بروز علایم و سیستمیک شدن بیماری نقش دارند اما کارایی لازم را جهت مهارکنندگی خاموشی ندارند. این پژوهش مدل بررسی فعالیت ممانعت کنندگی از rna silencing را بیان می نماید.

A method for Evaluation of RNA Silencing Suppression Activity in Plants Using two Proteins of Grapevine Fanleaf Virus (GFLV)

Suppressor proteins of RNA Silencing have been well described in most genera of plant viruses. The methodogy for identifying gene silencing suppressor activity of a protein in a plant system has proven to be an important tool. Grapevine fanleaf virus (GFLV) is one of the most common viral diseases in grapevines worldwide and can cause up to 80% crop losses. GFLV is a bipartite member of the Nepovirus subgroup A in the family Secoviridae and has a singlestranded positivesense RNA genome. A viral suppressor of RNA silencing (VSR) in Nepoviruses has not yet been described and our knowledge of symptom determinant genes in nepeoviruses is very limited. In this study, a transgenic GFP gene was silenced in transgenic Nicotiana benthamiana line 16c, and then the ability of GFLV polymerase and movement proteins to suppress gene silencing was evaluated. The efficiency of these two proteins was compared with positive and negative controls. The results showed that neither protein had the ability to suppress gene silencing. However, these proteins are involved in symptom production and systemic infection. This study demonstrates a model method for evaluation of suppressor activity of RNA Silencing.