بهینه سازی کشت بافت و انتقال ژن gus به موسیر با استفاده از آگروباکتریوم

موسیر (allium stipitatum) یک سبزی خوراکی بوده و از خصوصیات دارویی بسیار مهمی برخوردار است. بنابراین بهینه سازی یک سیستم باززایی و تراریزش کارآمد در این گیاه جهت بهبود و اصلاح آن از طریق مهندسی ژنتیک ضروری است. دراین مطالعه، ریزنمونه های جنین، طبق پیاز و ریشه درون شیشه ای موسیر درمحیط کشت ms حاوی غلظت های مختلفی از تنظیم کننده های رشد naa، 2,4d و ba به منظور القاء کالوس و باززایی کشت شدند. ریزنمونه ها با سویه lba4404باکتری agrobacterium tumefaciens دارای ناقل pbi121 حاوی ژن گزارشگر gus تراریزش شدند. نتایج نشان داد که ریزنمونه طبق پیاز نسبت به جنین و ریشه کالوس زایی و باززایی بالاتری داشت و بیشترین باززایی (100 درصد) در ریزنمونه طبق پیاز و در محیط کشت ms حاوی پنج میلی گرم در لیترba به همراه یک میلی گرم در لیتر naa، صورت گرفت. به منظور اثبات حضور ژن gus، واکنش زنجیره ای پلیمراز انجام شد و وجود این ژن را در هر دو ریزنمونه جنین وطبق پیاز، که به آزمون هیستوشیمیایی gus پاسخ مثبت داده بودند، اثبات کرد. همچنین عدم آلودگی ناشی از آگروباکتریوم در گیاهان تراریخته بااستفاده ازآغازگرهای اختصاصی ژن virg به کمک واکنش زنجیره ای پلیمراز تایید شد. در این تحقیق کارایی تراریزش در ریزنمونه جنین 10 درصد و در ریزنمونه طبق پیاز6/6 درصد محاسبه شد.

Optimizing tissue culture and GUS gene transformation to shallots using Agrobacterium

Shallot (Allium stipitatum) is an edible vegetable that has important pharmacological properties. Therefore, optimization of an efficient in vitro regeneration and transformation system for shallot breeding through genetic engineering would be useful. Embryo, root and bulb explants of shallot were cultured in vitro on MS basal medium supplemented with different concentrations of growth regulators (NAA, 2,4D and BA) for callus induction and plantlet regeneration. Explants were transformed using Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 and pBI121 plasmid carrying the gus reporter gene. The results indicated that bulb had a higher efficiency of callus induction and plantlet regeneration (100%) compared to embryo and root explants. The highest percentage of regeneration (100 %) was observed on MS medium supplemented with 5 mg.l1 BA and 1 mg.l1 NAA for bulb explants. Polymerase chain reaction (PCR) analysis of guspositive transformants confirmed genetic transformation of the cultures. Furthermore, the lack of Agrobacteriumrelated infection was confirmed using virGspecific markers. In this study, the efficiency of transformation was 10 and 6.6% in embryo and bulb, respectively.