استفاده از پلتفرم سوسپانسیون سلول‌های گیاهی by-2 برای تولید آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز

به دلیل افزایش تقاضا برای پروتئین‌های نوترکیب عاری از فرآورده‌های حیوانی، سلول‌های گیاهی به عنوان یک پلتفرم مناسب برای تولید این پروتئین‌ها مورد توجه می‌باشند. نگهداری ارزان، ساده بودن جداسازی و خالص‌سازی محصول تولید شده و کشت مستقل از شرایط آب و هوایی، کیفیت خاک، فصل‌ها، طول روز و وضع هوا از مزیت‌‌های استفاده از سوسپانسیون‌های سلولی می‌باشد. در این تحقیق از سلول‌های گیاهی by-2  استفاده شد که علاوه بر مزیت‌های فوق، سرعت تقسیم بالای سلولی از ویژگی‌های مهم سلول‌های by-2 است. به منظور بهینه‌سازی انتقال و بیان ژن در سلول‌های by-2، ابتدا ژن گزارشگرβ-glucuronidase (gus) به این سلول‌ها منتقل شد. برای اثبات حضور ژنgus  در سلول‌های by-2، قطعه bp521 مورد انتظار با استفاده از pcr تکثیر شد. جهت تایید بیشتر تراریخته بودن سلول‌های by-2، از سنجش بیوشیمیایی gus که باعث تغییر رنگ (آبی) سلول‌‌ها می‌شود استفاده شد. جهت بیان  آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز، ژن (bgni) β-1,3 glucanase حاوی اینترون از جدایه قارچ trichoderma virens در وکتور دوگانه pbi121gus-  همسانه‌سازی و سازه بدست آمده به سلول‌های by-2 جهت بیان پروتئین منتقل شد. بررسی بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز در سلول‌های تراریخته، با استفاده از الگوی پروتئینی توسطsds-page  انجام گرفته و بیان آنزیم مورد نظر در سلول‌هایby-2  مورد تایید قرار گرفت. برای تعیین فعالیت آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز (bgni) از روش دی نیترو سالسیلیک اسید (dns)، جهت اندازه‌گیری مقدار قند‌های احیا شده حاصل از عمل این آنزیم استفاده شد. نتایج بدست آمده نشان داد که سلول‌های by-2 تراریخته قادر به بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز فعال می‌باشند.

utilizing plant by-2 cell suspension platform for the production of beta-1, 3-glucanase enzyme

due to the increasing demand for recombinant proteins free from animal products, plant cells are considered as a suitable platform for the production of these proteins. plant cells have advantages such as low maintenance cost, ease of separation and purification of the produced products, and independent cultivation from weather conditions, soil quality, seasons, day length, and weather conditions. in this study, by-2 plant cells were used as a platform for producing recombinant proteins. by-2 cells have a high cell division rate, which is an important feature of these cells. to optimize the transfer and expression of genes in by-2 cells, the gus reporter gene was transferred to these cells. expression of this gene leads to a measurable phenotype. to confirm the presence of the gus gene in by-2 cells, the expected 521bp fragment was observed using pcr. additionally, to further confirm the biochemical expression of gus in by-2 cells, cell blue staining was observed. to express the beta-1,3-glucanase enzyme, the intron containing bgni gene from the t. virens fungal strain was transferred to by-2 cells using the pbi121gus- dual vector. the expression of the protein in by-2 cells was confirmed by sds-page analysis. the activity of the beta-1,3-glucanase enzyme (bgni) was determined using the dinitrosalicylic acid (dns) method to measure the amount of reducing sugars produced by the enzyme. the results showed that the transgenic by-2 cells were capable of expressing active beta-1,3-glucanase enzyme.