همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس pvx در باکتری به منظور تولید حامل داروهای ضد سرطان

استفاده از ویروسهای گیاهی به عنوان حاملهای داروهای ضد سرطان در پزشکی روز به روز درحال افزایش است. تشخیص ویروس ها با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی نیز اهمیت ویژه ای برای کنترل بیماری های گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب زمینی دارد. یکی از مهمترین ویروس های سیب زمینی (pvx)  potato x potexvirus  با گستره جهانی و جزو اولین ویروسهای گیاهی مورد استفاده به عنوان حامل داروهای ضد سرطانی می باشد. در این تحقیق به منظور تولید پیکره های  pvx، ژن coat protein (cp) آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش  rt-pcrبا استفاده از آغازگر های اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر cp انجام گرفت. الکتروفورز محصول pcr بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول bp 714 را تایید کرد. ژن cp و پلاسمید  pgbkt7 توسط آنزیم های  bamhiو ecori برش داده شدند و پس از خالص سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pgbkt7 -cppvx با الکتروپوراسیون به باکتری e. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتری های حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک pcr و استخراج پلاسمید از آنها، توالی یابی درست بودن توالی ژن کلون شده را تایید کرد. در ادامه ژن cp در پلاسمید بیانیpet-21a به روش برش و لیگاسیون همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب به سویه bl21 باکتری e. coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن iptg در محیط کشت باکتری تولید پروتئین cp از روی پلاسمید انجام و پروتئین های باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین، بیان شدن cp را نشان داد. این پروتئین پس از خالص سازی میتواند به عنوان حامل داروهای ضد سرطان کاربرد داشته باشد.

cloning and expression of pvx coat protein in bacterium in order to produce carrier of anticancer drugs

the use of plant viruses as carriers of anti-cancer drugs in medicine is increasing day after day. one of the most important potato viruses is potato x potexvirus (pvx) which is globally expanded and is one of the first plant viruses used as a carrier of anticancer drugs. in this research, in order to produce pvx particles, its coat protein (cp) gene was expressed. first, the rt-pcr reaction was performed for cp amplification using specific primers containing the endonuclease digestion sites. electrophoresis of the pcr product on agarose gel confirmed the amplified fragment with a length of 714 bp. then the cp gene and pgbkt7 plasmid were digested by bamhi and ecori enzymes and after purification, ligation was done between them. recombinant plasmid pgbkt7-cppvx was transferred to e. coli bacteria by electroporation. after selecting the bacteria containing the recombinant plasmid by pcr and extracting the plasmids from them, sequencing confirmed the correctness of the cloned gene sequence. then, the cp gene was cloned into pet-21a expression plasmid by digestion and ligation method. the recombinant plasmid was transferred to bl21 strain of e. coli and cultured. by adding iptg in the bacterial culture medium, cp protein was expressed from the plasmid and bacterial proteins were extracted. protein electrophoresis showed the expression of cp. after purification, this protein can be used as a carrier of anti-cancer drugs.