انتقال ژن epsps به نخود به منظور مقاومت به علفکش گلایفوسیت

نخود (cicer arietinum) در رقابت با علف‌های هرز بسیار حساس بوده و دچار کاهش عملکرد و کیفیت محصول می‌شود. لذا تولید گیاهان مقاوم به علف‌کش‌های عمومی نظیر گلایفوسیت مفید می‌باشد. در این تحقیق، ازagrobacterium tumefaciens سویه lba4404 حاوی پلاسمید pbi121 و ژن موتاسیون یافته epsps برای ایجاد مقاومت به علف‌کش گلایفوسیت استفاده شد که در آن ژن nptii به‌ عنوان گزینشگر تحت پیش‌بر 35s قرار گرفته است. به‌منظور انتقال ژن از محورهای جنینی نخود رقم ثمین و بیونیج استفاده شد. ریزنمونه ها پس از هم‌کشتی با سوسپانسیون باکتری به مدت سه روز در محیط هم‌کشتی b5 قرار گرفت و پس از آن به‌منظور باززایی به محیط کشت ms به همراه غلظت مناسبی از هورمون‌های bap، kin و naa منتقل گردید. درنهایت پس از گزینش‌های متوالی با استفاده از آنتی بیوتیک کانامایسین، ریشه‌زایی و استقرار گیاهان t0 در محیط هیدروپونیک انجام شد و با استفاده از آزمون pcr، در 15گیاه ژن اختصاصی epsps و ژن nptii تکثیر و تراریختگی آنها تایید شد. عدم آلودگی گیاهان مشکوک به تراریخته با استفاده از آغازگرهای نواحی its باکتری و همچنین با بررسی بیان ژن مورد نظر با استفاده از آزمون rt-pcr تایید شد و درصد تراریختگی در این بررسی 0.75 درصد بود.

transfer of the epsps gene to chickpea (cicer arietinum) for resistance to glyphosate herbicide

chickpea (cicer arietinum) is very sensitive in competition with weeds and suffers from a decrease in yield and product quality. therefore, it is useful to produce plants resistant to general herbicides such as glyphosate. in this research, agrobacterium tumefaciens strain lba4404 was used. this bacterium contains plasmid pbi121 and mutated epsps gene of escherichia coli to create resistance to glyphosate herbicide. in this plasmid nptii gene is placed under 35s promoter as a selective gene. in order to transfer the gene, embryonic axes of chickpea varieties (samin and bivanij) were used. chickpea embryonic axes were placed on b5 co-culture medium after co-cultivation with bacterial suspension for 3 days and then transferred to ms culture medium with appropriate concentration of bap, kin and naa hormones for regeneration. finally, after successive selections using kanamycin antibiotic, rooting and establishment of t0 plants were done in hydroponic environment. then, pcr amplified epsps and nptii genes in 15 plants and their transgenecity was confirmed. non-contamination of dna in putative transgenic plants was confirmed by using the primers of the bacterial its regions. also the expression of the target gene verified using rt-pcr test and the transgenic percentage was 0.75% in this study.