بهینه سازی انتقال ژن کیتیناز به گوجه فرنگی رقم بناب با استفاده از آگروباکتریوم تومفاشینس

گوجه فرنگی از نظر غذایی، اقتصادی و علمی از اهمیت زیادی دارد. با توجه به اهمیت زراعی و حساسیت این گیاه نسبت به اغلب تنش های زنده و غیرزنده، استفاده از روش های نوین در اصلاح این گیاه نیاز می‌باشد. در این تحقیق عوامل موثر در تراریزش یک رقم محلی گوجه فرنگی زراعی بنام بناب از قبیل مدت زمان پیش کشت (1، 2، 3 و4 روز)، غلظت آگروباکتریوم تومفشینس (1 و 0.8، 0.6، 0.4= od600nm)، مدت زمان تلقیح (5، 10، 15 و 20 دقیقه)، سطوح مختلف استوسیرینگون (0، 100، 150 و 200 میکرومولار)، مدت زمان هم کشتی (1، 2، 3 و 4 روز) و غلظت های مختلف آنتی بیوتیک کانامایسین (5، 10، 15 و 20 میلی گرم در لیتر) مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد پیش کشت دو روزه ریز نمونه ها در تراریزش گیاهان اثر معنی داری داشت. بیشترین میزان تراریختی در غلظت باکتری 0.6=od600nm  حاصل شد. همچنین بیشترین میزان تراریختی در مدت زمان تلقیح 10 دقیقه و مدت زمان هم کشتی دو روز حاصل شد. حضور استوسیرینگون اثر افزایشی در کارایی تراریختی گوجه فرنگی داشت، به طوریکه بیشترین میزان تراریختی در غلظت 150 میکرومولار استوسیرینگون بدست آمد. در نهایت حضور ژن کیتیناز در گیاهان تراریخت به وسیله pcr مورد تایید قرار گرفت. شرایط بهینه بدست آمده در این مطالعه می تواند برای انتقال ژن های هدف به این رقم گوجه فرنگی استفاده شود.

optimization of chitinase gene transfer to tomatoes of bonab cultivar using agrobacterium tumefaciens

tomato is an important economic crop with nutritional and scientific value for study. due to its agronomic importance and the sensitivity to biotic and abiotic stresses, using new methods in breeding this crop is necessary. in this study, the effects of some factors, such as pre-cultivation time (1, 2, 3 and 4 days), agrobacterium concentration (od600nm = 0.4, 0.6, 0.8, and 1), inoculation time (5, 10, 15 and 20 minutes), acetosyringone concentration (0, 100, 150, and 200 μm), co-cultivation period (1, 2, 3 and 4 days) and different concentrations of the kanamycin (5, 10, 15 and 20 mg/l) on the transformation of a local cultivar of tomato called bonab, were evaluated. the maximum transformation efficiency was obtained at the od600= 0.6. also, the highest transgenic plants were obtained in the 10 minutes of inoculation and 2 days of co-cultivation. the presence of acetosyringone had an increasing effect on the tomato transformation, and the highest percentage of transformation was obtained at 150 m of acetosyringone. finally, the presence of a chitinase gene in the probable transgenic plants was confirmed by pcr. the optimal conditions that were obtained in this study can be used to transfer target genes to this tomato cultivar.