ایجاد مقاومت به ویروس y سیب زمینی (pvy) با استفاده از سازه سنجاق‌سری حاوی ژن پروتئین پوششی

یکی از بیماری‌های مهمی که سالانه خسارت‌های اقتصادی بسیاری به کشاورزان کشور وارد می‌کند و باعث افت عملکرد و کیفیت محصول می‌شود، ویروس y سیب‌زمینی (pvy) است. امروزه استفاده از سازوکار‌های ایجاد مقاومت ناشی از پاتوژن افق‌های جدیدی در راستای تولید گیاهان تراریخت مقاوم به ویروس گشوده است. در این پژوهش از روش خاموشی ژن برای ایجاد مقاومت بر علیه pvy استفاده شده است. برای این منظور از یک سازه ژنی rnai برگرفته از بخش پروتئین پوششی (cp) ژنوم pvy استفاده شد. سازه‌ با استفاده از اگروباکتریوم به ریزنمونه‌های‌ میانگره و برگ گیاه سیب‌زمینی انتقال داده شد. درصد نوساقه‌های تولید شده در محیط انتخابی حاوی علفکش فسفینوتریسین پس از رشد و تکثیر مورد ارزیابی قرار گرفت. تراریختی بوته‌ها و بررسی بیان ژن در گیاهان تراریخته با استفاده از آزمون زنجیره‌ای پلیمراز (pcr) و rtpcr بررسی شد. بر اساس نتایج 42 درصد گیاهان باززا شده تراریخته بودند. بیان ژن cp نیز در اغلب لاین‌ها به اثبات رسید. به منظور تعیین مقاومت گیاهان تراریخته در برابر آلودگی pvy، آزمون زیست‌سنجی صورت گرفت. نتایج حاصله نشان داد که حدود 82 درصد گیاهان سیب‌زمینی تراریخت نسبت به آلودگی pvy مقاوم هستند.

Induction of Resistance to Potato Virus Y (PVY) Using Hairpin Construct of Coat Protein

Potato virus Y (PVY) is one of the most damaging viruses of potato plants which infects most cultivars and causes a significant decrease in yield products quality and also economical losses annually. Recently, the application of pathogen derived resistance mechanisms has opened new horizons for the development of virusresistant transgenic plants. This research was carried out to study RNA silencing to engineered potato plants that are resistant to potato virus Y (PVY). RNAi construct was designed from coat protein (CP) segment of PVY. Potato explants were transformed by Agrobacterium tumefaciens AGL1 with pCAMRNAiCP containing bar selectable gene. The rate of regenerated plants was evaluated in the selected medium containing the herbicide phosphinotricin after growth and propagation. Transgenic plants and their gene expression were investigated using polymerase chain reaction (PCR) and RTPCR. Results showed that 42 percent of regenerated plants were transformed. The expression of CP hairpin construct was determined by RTPCR analysis in most of the lines. PVY resistance bioassay showed that 82 percent of transgenic potato plants were resistance to PVY.