بررسی عوامل موثر در انتقال ژن به سویا از طریق آگروباکتریوم

تراریختی به واسطه آگروباکتریوم یکی از موثرترین روش ها برای تولید گیاهان تراریخته سویا به شمار می آید. کارایی تراریختی سویا با آگروباکتریوم به عوامل مختلفی بستگی دارد. این پژوهش با هدف بررسی امکان تولید اینترفرون گامای انسانی در گیاه سویا انجام گرفت. بدین منظور برخی عوامل موثر در تراریختی سویا از قبیل غلظت آگروباکتریوم (1 و 0.8 ،0.6 ،0.4 ،0.2=od600nm)، مدت زمان تلقیح (10، 20، 40 و 60 دقیقه)، مدت زمان هم کشتی (1، 2، 3، 4 و 5 روز) و سطوح مختلف استوسیرینگون (0، 50، 100، 150، 200 و 250 میکرومولار) مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج نشان داد، بیشترین میزان تراریختی در غلظت 0.8 =od600nm و کمترین میزان تراریختی در غلظت 0.2 =od600nm حاصل شده است. همچنین بیشترین میزان تراریختی در مدت زمان تلقیح 40 دقیقه و مدت زمان هم کشتی 4 روز و کمترین میزان تراریختی در مدت زمان تلقیح 10 دقیقه و مدت زمان هم کشتی 1 روز مشاهده شد. حضور استوسیرینگون اثر افزایشی در کارایی تراریختی سویا داشت، به طوری که بیشترین میزان تراریختی در غلظت های 150 تا 200 میکرومولار استوسیرینگون حاصل شده است. در نهایت حضور ژن اینترفرون گامای انسانی در گیاهان تراریخته احتمالی به وسیله تکنیک pcr و آغازگرهای اختصاصی تایید شد. شرایط بهینه بدست آمده در این مطالعه می تواند برای انتقال ژن های هدف به این رقم سویا استفاده شود.

Study on the factors affecting Agrobacterium-mediated transformation of soybean

Agrobacteriummediated transformation is one of the most effective methods for producing the transgenic soybean plants. The efficiency of soybean transformation with Agrobacterium depends on the various factors. The aim of this study was investigating the possibility of human interferon gamma production in soybean. For this purpose, some effective factors in soybean transformation such as Agrobacterium concentration (OD600nm = 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 and 1), inoculation time (10, 20, 40 and 60 minutes), cocultivation time (1, 2, 3, 4 and 5 days) and different levels of acetosyringone (0, 50, 100, 150, 200 and 250 mu;M) were evaluated. The results showed that the highest percentage of transformation was observed in the OD600nm= 0.8 and the lowest percentage of transformation was obtained at the OD600nm= 0.2. Also, the highest percentage of transformation was obtained in the 40 minutes of inoculation and 4 days of cocultivation and the lowest percentage of transformation was observed in the 10 minutes of inoculation and 1 day of cocultivation. The presence of acetosyringone had the increasing effect on the soybean transformation efficiency, and the highest percentage of transformation was obtained at the 150 until 200 mu;M of acetosyringone. Finally, the presence of human interferon gamma gene in the probable transgenic plants was confirmed by the PCR technique and specific primers. The optimal conditions that obtained in this study can be used to transfer target genes to this soybean cultivar.