طراحی و بیان کایمری پپتید لاکتوفرامپین - لاکتوفریسین گاوی با هدف تولید نوترکیب این پروتئین در گیاه توتون

لاکتوفرین که شامل پپتیدهای لاکتوفرامپین و لاکتوفریسین می‌باشد یکی از گلیکوپروتئین‌های شیر با خواص ضد میکروبی است. لاکتوفرین به عنوان جزء ذاتی سیستم ایمنی مطرح بوده و اولین سد دفاعی در برابر حملات میکروبی را نشان می‌دهد. هدف از این پژوهش سنتز کایمری این دو زیر واحد پپتیدی و ارزیابی تاثیر پپتید نوترکیب تولید شده روی پاتوژن‌های شاخص مواد غذایی بود. توالی کایمری لاکتوفرامپین لاکتوفریسین پس از بهینه شدن بر اساس کدون ترجیحی بیان شونده در گیاه توتون، به صورت مصنوعی درون وکتور pghسنتز شد و سپس به وکتور بیانی pbi121 منتقل گردید. پلاسمید بیانی نوترکیب از طریق فرآیند ذوب و انجماد به باکتری آگروباکتریوم ریزوژنز منتقل شد. در نهایت با کمک روش دیسک برگ به گیاه توتون منتقل گردید. استخراج پروتئین نوترکیب از گیاه توتون با استفاده از روش trishcl انجام و فرآیند تخلیص با استفاده از کروماتوگرافی ستون‌های نیکل آگارز انجام شد. آزمایش mic در میکروپلیت 96 خانه استریل و با روش رقیق سازی انجام شد .در نهایت نتایج نشان داد که مقدار پروتئین نوترکیب 1.52 میلیگرم در میلی‌لیتر می‌باشد و کیفیت مطلوبی نیز دارد. همچنین نتایج نشان داد که ترکیب کایمری اثر بازدارندگی خوبی روی میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا دارد.

Designing and Expression of Bovine Chimeric Lactoferrampine - Lactoferricin Peptide with Aim of Recombinant Protein Production in Tobacco

Lactoferrin, which consists of lactoferampin and lactoferricin peptides, is one of the milk glycoproteins with antimicrobial properties. Lactoferrin is known as a component of intrinsic immunity which points to first barrier against microbes. The aim of this study was the chimeric synthesis of this two peptides and also producing transgenic product. One of the desired methods to produce recombinant peptides is by transferring their genes to plant cells and producing hairy roots. In this study, the sequence of chimeric LfampinLfcin was codon optimized based on Tobacco expression system. The target sequence was artificially synthesized in pGH vector and then subcloned into the pBI121 expression vector. The expression vector was transferred to Agrobacterium rhizogenes through freez defreezing process. Then it was transferred to Tobacco plant using leaf disc method. Extraction of recombinant protein was done using TrisHCl method and purification process was accomplished by chromatography Niagarose columns. Finally, the results showed that the amount of recombinant protein was 1.52 mg/ml and its quality was also desirable. The results also showed that chimeric composition has a good inhibitory effect on pathogenic microorganisms.