انتقال ژن cry1a105 به گوجه‌فرنگی به‌منظور افزایش مقاومت به آفت heliothis sp

گوجه‌فرنگی (solanum lycopersicum) یکی از مهم‌ترین سبزی‌ها در جهان است که طیف وسیعی از پاتوژن ها و آفات گیاهی به این گیاه حمله می‌کنند. یکی از مهم‌ترین این آفات، لارو هلیوتیس است که عمدتاً به میوه و برگ خسارت زده و باعث کاهش محصول می‌شود. ﺩﺭ ﺍﻳﻦ ﭘﮋﻭﻫﺶ ﺗﺮﻛﻴﺐ ﺳﺎﺯﻩ ژﻧﻲ cry1a105 تحت راه انداز دائمی camv 35s و خاتمه دهنده nos ﺩﺭ ناقل pbi121 همسانه سازی ﺷﺪﻩ ﻭ ﺑﻪ ﺍﮔﺮﻭﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻮﻡ تومفاسینس ﺳﻮﻳﻪ lba4404 منتقل و سپس ﺑﻪ ﮔﻴﺎﻩ گوجه‌فرنگی انتقال داده شد. ریز نمونه‌های برگ لپه‌ای ﺍﺯ ﮔﻴﺎﻩ گوجه‌فرنگی ﺑﺮﺍﻱ ﺗﺮﺍﺭﻳﺰﺵ مورد استفاده ﻗﺮﺍﺭ ﮔﺮﻓﺘﻨﺪ. ﮔﻴﺎﻫﺎﻥ ﺗﺮﺍﺭﻳﺨﺘﻪ احتمالی ﺑﺮ ﺭﻭﻱ ﻣﺤﻴﻂ ms ﻫﻤﺮﺍﻩ ﺑا ﻭﻳﺘﺎﻣﻴﻦ b5 ﺣﺎﻭﻱ 0.3 میلی‌گرم در لیتر naa و 1.5 میلی‌گرم ﺩﺭ ﻟﻴﺘﺮ bap و نیز 50 میلی‌گرم ﺩﺭ ﻟﻴﺘﺮ ﺁﻧﺘﻲ ﺑﻴﻮﺗﻴﻚ ﻛﺎﻧﺎﻣﺎﻳﺴﻴﻦ ﺍﻧﺘﺨﺎﺏ ﺷﺪﻧﺪ. ﺗﺠﺰﻳﻪ ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ ﮔﻴﺎﻫﺎﻥ ﺗﺮﺍﺭﻳﺨﺘﻪ (t0) ﺑﺎ ﺍﺳﺘﻔﺎﺩﻩ ﺍﺯ pcr ﻭﺟﻮد ژن cry1a105 ﺭﺍ ﺩﺭ ﮔﻴﺎﻫﺎﻥ ﺗﺮﺍﺭﻳﺨﺘﻪ تائید ﻛﺮﺩ. از گیاهانی که pcr مثبت نشان دادند بذرگیری به عمل آمد، گیاهان مورد نظر تا نسل t2 کشت شدند و در این نسل وجود ژن انتقال یافته در آن‌ها با آنالیز مولکولی (rt-pcr) مورد بررسی قرار گرفت. گیاهانی که وجود ژن موردنظر در آن‌ها تائید شده بود با آزمون زیستی مورد بررسی قرار گرفتند. آزمون زیست‌سنجی مقاومت رقم گوجه‌فرنگی کارون را (70%) به آفت لارو هلیوتیس در مقایسه با شاهد نشان داد.

Transformation of Cry1a105 gene to tomato in order to increase resistance to Heliothis sp

Tomato (Solanum lycopersicum L.) is an important vegetable in the world, it exposes to a wide range of pathogens and plant pests attack. Fruit worm is one of the most important pest of tomato that mainly damage the fruit and causes the yield reduction. In this study, cry1a105 gene was cloned to pBI121 plasmid (under 35S promoter and Nos terminator), and was transferred to tomato by Agrobacterium tumefaciens LBA4404 strain. The cotyledons of different tomato cultivars were used for gene transformation. The candidate transgenic plants have been selected on MS medium complemented with vitamins of B5 and 0.3 mg/L NAA, 1.5 mg/L BAP, and 50 mg/L of kanamycin antibiotic. Molecular analysis using polymerase chain reaction ( PCR ) confirmed the presence of cry1a105 gene in transgenic plants (T0). The candidate plants were cultivated until T2 generation and then the expression of gene were studied by molecular analysis (RT PCR ). The gene expression in the plants were confirmed, then they were examined by bioassay analysis. Bioassay analysis showed that the transformed Karun cultivar had a high resistance (70%) to tomato fruit worm than the control treatment.