شناسایی گروه غالب ویروس اس سیب زمینی (pvs) در ایران و بیان ژن پوشش پروتئینی آن

بیان ژن ویروس ها در باکتری برای مطالعه پروتئین ویروس ها و تولید آنتی بادی اختصاصی مورد استفاده قرار می گیرد. در این پژوهش، نمونه های سیب زمینی از هشت استان ایران جمع آوری شده و ردیابی ویروس potato virus s، به عنوان یکی از مخرب ترین ویروس های سیب زمینی، بوسیله داسالیزا و آرتیپی سی آر انجام گرفت. تعیین گروه غالب با توجه به توالی ژن پوشش پروتئینی و پس از تجزیه فیلوژنی انجام شد. ژن کامل cp تکثیر و همسانه سازی شده و مورد توالی یابی قرار گرفت، سپس از پلاسمید pjet1.2/blunt برش داده شده و به پلاسمید بیان pet28a (+) متصل شد و سازه (pet28a:pvs:cp) به باکتری escherichia coli سویه bl21 منتقل شد. بهینه سازی بیان ژن با القا بوسیله iptg در غلظت های 0.5، 1 و 2 mm به مدت 3، 4 و 6 ساعت انجام گرفت و توسط sdspage و وسترن بلات تایید شد. بر اساس توالی نوکلئوتیدی، جدایه های ایرانی pvs به سه گروه تقسیم شدند که یک گروه با 22 عضو به عنوان گروه غالب شناخته شد. بیان پروتئین نوترکیب با وزن 34 کیلودالتون توسط وسترن تایید شد. القاء با غلظت 1 میلی مولار iptg و به مدت 4 ساعت بهترین بیان را نشان داد. این نخستین گزارش بیان ژن پوشش پروتئینی ویروس pvs است که برای تهیه آنتی بادی این ویروس اهمیت دارد.

Identification of dominant isolate of Potato virus S in Iran and heterologous expression of its coat protein

Gene expression in bacteria have already been used to study the protein of viruses and to produce specific antibodies. In this research, potato samples were collected from eight provinces of Iran and were tested for Potato virus S, as one of the most destructive viruses of potato fields, by DASELISA and RTPCR. Dominant isolate of PVS was selected according to coat protein (CP) gene sequences following phylogenetic analysis. Full length CP gene was amplified, cloned and sequenced, then was digested from pJET1.2/blunt vector, ligated into the expression vector pET28a and the construct (pET28a:PVS:CP) was transformed into Escherichia coli BL21 strain. Gene expression was optimized by induction with 0.5, 1 and 2 mM final concentrations of IPTG for 3, 4 and 6 h and was verified by SDSPAGE and Western blotting. Based on the nucleotide analysis, the Iranian isolates of PVS were divided into three groups that one group with 22 members known as the dominant group. The expression of recombinant CP of about 34 kDa was proved by western blotting. Induction by 1 mM IPTG for 4 h proved to be the most efficient method of expression. This is the first report of the expression of PVS CP gene, which is important for the preparation of antiPVS antibody.