ارزیابی سریع پیشبرهای بذری در برگ با استفاده از فاکتور رونویسی lec2

فاکتور رونویسی lec2 یکی از فاکتورهای رونویسی است که با اتصال به توالی پیشبرهای بذری سبب بیان ژن های پایین دستی می شود. استفاده از این فاکتور رونویسی در کنار روش آگرواینفیلتریشن می تواند زمان ارزیابی پیشبرهای بذری را با توجه به حذف زمان طولانی مدت انتقال دائم تا بذردهی کاهش دهد. در این تحقیق اختصاصی بودن بیان بذری ژن تحت کنترل پیشبر fad21 پس از جداسازی از گیاه گلرنگ با استفاده از آنالیز بیان ژن gus در برگهای توتون مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج توالی یابی پیشبر fad21 نشان داد که این قطعه جدا شده از بالادست ژن fad21 حاوی عناصر اساسی برای بیان اختصاصی در بذر است. جهت ارزیابی سریع اختصاصی بودن بیان بذری در پیشبر ژن fad21 دو کاست ژنی طراحی گردید: کاست ژنی اول pfad2gus (ژن gus و پیشبر ژن (fad21 و کاست ژنی دوم pbilec2 (ژن lec2 و پیشبر 35s). کاست های ژنی به صورت جداگانه در وکتور pbi121 کلون شده و در نهایت به سویه eha105 آگروباکتریوم منتقل شدند. به منظور بررسی سریع عملکرد این پیشبر، آگروباکتریوم های حاوی دو سازه بصورت جداگانه آماده و کشت شده و پس از تنظیم غلظت هر دو کشت بر روی od600=0.6 به نسبت مساوی با هم مخلوط و به برگهای توتون تزریق شد. با آبی شدن برگهای تزریق شده با سازه یک+سازه دو و عدم مشاهده رنگ در برگهای تزریق شده با سازه یک یا سازه دو اختصاصی بودن بیان بذری این پیشبر تایید شد. نتایج نشان داد که فاکتور رونویسی lec2 با شناسایی توالی های خاص در بالادست ژنهای بذری سبب بیان ژنهای پایین دستی می شود. از اینرو این تحقیق پیشنهاد می کند که فاکتور رونویسی lec2 به همراه روش آگروینفیلتریشن می تواند به عنوان ابزاری کارا و سریع در تایید قطعاتی که بالقوه به عنوان پیشبر بذری جداسازی می شوند، استفاده شود.