استفاده از تکنیک pcr کمی برای کمیت سنجی fusarium solani f.sp. phaseoli در لوبیا سفید حساس و مقاوم

بیماری پوسیدگی فوزاریومی ریشه لوبیا توسط بیمارگر خاکزی f.sp. phaseolifusarium solani ایجاد می شود و خسارت فراوان در مزارع لوبیا دنیا و ایران ایجاد می کند. در حال حاضر مهمترین و اقتصادی ترین روش کنترل این بیماری استفاده از ارقام مقاوم می باشد. برای این منظور در این تحقیق عکس العمل پنج رقم رایج کشت و 14 لاین لوبیا سفید به قارچ عامل بیماری پوسیدگی فوزاریومی ریشه لوبیا ابتدا به صورت ارزیابی مورفولوژیک و سپس کمیت سنجی باreal-time pcr انجام شد. بر اساس نتایج ارزیابی مورفولوژیک لاین kbc43106 و رقم درسا به ترتیب حساس و متحمل شناخته شدند، سپس به منظور ارزیابی کمی و روند رشد قارچ عامل بیماری در لاین حساس و رقم متحمل گیاهچه های دو برگچه ای با غلظت 10^7 اسپور در میلی لیتر قارچ عامل بیماری به روش فرو بردن ریشه (root dip) تلقیح گردیدند و در فواصل زمانی صفر،2 ، 7، 15، 21 و 30 روز پس از آلودگی از ریشه گیاهچه های تلقیح شده و شاهد نمونه برداری و استخراج dna از آنها انجام شد. روند افزایش تدریجی میزان dna قارچ موجود در ریشه ها با استفاده از تکنیک real time pcr و به کارگیری سیستم sybr green همراه با آغازگرهای اختصاصی برای ژن elongation factor 1 -α کمیت سنجی گردید. نتایج نشان داد تفاوت معنی داری بین مقدار dna بیمارگر در ریشه گیاهان حساس و متحمل وجود دارد و بنابراین تکنیک real time pcr ، تکنیک مناسبی برای ارزیابی مقاومت ارقام و لاین های لوبیا می باشد.

Development of a Quantitative PCR Assay for Quantification of Fusarium solani f.sp. phaseoli in Resistant and Susceptible White Bean

Bean root rot caused by soil pathogenic fungus, F.solani f.sp. phaseoli, is considered as one of the most important diseases of bean in the world and in Iran. At the moment use of resistant cultivars is the most effective method of control. For this reason, the response of five cultivars and 14 lines of white beans were evaluated to Fusarium root rot. Firstly, a morphological evaluation of disease symptoms and then real time PCR quantification were performed. Based on the results of morphological evaluation the KBC43106 line and cultivar Dorsa, were found to be sensitive and tolerant, respectively. For quantitative assessment and growth trend of the pathogen in sensitive and tolerant genotypes, the bean seedlings were inoculated by 107 suspension of relevant pathogen with root dip method, then DNA was extracted from root of inoculated and control seedlings at regular sampling intervals. The gradual increase in the amount of fungal DNA of roots was quantified by Real time PCR technique and utilizing of SYBR Green system with specific primers for elongation factor 1 alpha; gene. The results showed that there is a significant difference between the amount of pathogen DNA in the roots of susceptible and tolerant plants, so Real time PCR technique is suitable for resistance screening of bean genotypes against Fusarium root rot.