تاثیر پودر میوه پنج‌انگشت بر بیان ژن نشانگرهای اوویداکت مرغ‌های تخمگذار

مقدمه و هدف: فیتواستروژن‌ها، استروژن‌های گیاهی با عملکرد و ساختار استروژن هستند. استروژن در فرآیند سنتز پروتئین‌های سفیده تخم‌مرغ در مجرای اویداکت مرغ نقش مهمی ایفا می‌کند. گیاه پنج‌انگشت یک گیاه بومی کشورهای آسیای میانه، مرکزی، جنوب اروپا و کشورهای مدیترانه است. این گیاه در طب سنتی کاربردهای متعددی دارد. مطالعات قبلی نشان داده است که گیاه پنج‌انگشت حاوی سطوح بالایی از فیتواستروژن است. فعال‌ترین فیتواستروژن‌ها در پنج‌انگشت شامل آپیژنین، وایتکسین و پندولتین است. تاکنون مطالعه‌ای در مورد اثر فیتواستروژن های گیاه پنج‌انگشت بر بیان نشانگرهای ژنی اوویداکت (اووآلبومین و اووموئید) مرغ تخمگذار منتشر نشده است. از این رو، این مطالعه به منظور بررسی تاثیر میوه‌های گیاه پنج‌انگشت بر بیان ژن های اووآلبومین و اووموئید اویداکت مرغ‌های تخم گذار انجام شد. مواد و روش ها: تعداد 90 قطعه مرغ تخم گذار لگهورن (hy-line, w-36) در چرخه دوم تولید (در سن 72 تا 80 هفتگی) در قالب طرح کاملاً تصادفی با سه تیمار، پنج تکرار و 6 قطعه مرغ در هر تکرار مورد استفاده قرار گرفت. تیمارها شامل سطوح مختلف پودر میوه پنج‌انگشت شامل سطوح صفر، 1 و 2 درصد پودر میوه پنج‌انگشت به ازای هر کیلوگرم جیره بودند. پس از استخراج rnaی کل، کیفیت rna با استفاده از نانودراپ و الکتروفورز ژل آگارز مورد بررسی قرار گرفت و با استفاده از کیت سیناکلون cdna سنتز شد. میزان بیان ژن با استفاده از تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی اندازه گیری شد. در این روش از ژن بتااکتین به عنوان ژن مرجع جهت نرمال نمودن داده‌ها استفاده شد. برای تایید اختصاصیت هر پرایمر نمودار ذوب آن مورد بررسی قرار گرفت. یافته­ ها: الکتروفورز ژل آگارز محصولات واکنش زنجیره‌ای پلیمراز به ترتیب قطعات 60، 133 و 150 جفت باز را برای اووآلبومین، اووموئید و بتااکتین نشان داد. همه نمودارهای ذوب دارای یک پیک بودند که نشان دهنده حداقل دایمر پرایمر و اختصاصیت پرایمرها برای هر ژن بود. نتایج واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در زمان واقعی نشان داد که مکمل ‌سازی میوه‌ پنج‌انگشت در سطوح 1 و 2 به جیره مرغ‌های تخمگذار تاثیری بر بیان ژن‌های اووآلبومین و اووموئید مرغ‌ تخمگذار ندارد.نتیجه گیری: انتظار نمی‌رود که افزودن پودر میوه‌ پنج‌انگشت به جیره مرغ‌های تخمگذار سبب افزایش تولید در مرغ تخمگذار شود. بنابراین افزودن گیاه پنج‌انگشت به جیره مرغ های تخمگذار پیشنهاد نمی شود.

the effect of vitex agnuse castus fruits powder on oviduct markers gene expression of laying hens

introduction and objective: phytoestrogens are herbal estrogens with estrogen-like functions and structures. the estrogen hormone has an important role in the process of the synthesis of egg white proteins in the avian oviduct. vitex agnus-castus (vac) is a native plant of the middle asian, southern european, and mediterranean countries. this plant has numerous uses in traditional medicine and is traditionally used to treat many diseases in women. previous studies have shown that vac contains high levels of phytoestrogens. vac consists of compounds such as vitexin, apigenin, and pendoltin, which are the most active phytoestrogen in vac fruits. no study has been published so far on the effect of vac on oviduct markers gene expression (ovalbumin (oval) and ovomucoid (ovm)). hence, this study was performed to evaluate the effect of vac fruits on gene expression for two oviduct markers oval and ovm of laying hens. material and methods: a total of 90 leghorns (hy-line, w-36) laying hens on the second cycle of production (at 72 to 80 weeks old) were used in a completely randomized design with three treatments, five replicates and six hens per replivate. the treatments were various levels of vac fruit powder including zero, 1, and 2% levels of vac fruit powder per kg of diet. after extraction of total rna, rna quality was evaluated using nanodrop and agarose gel electrophoresis and cdna was synthesized using a sinaclone kit. eventually, gene expression was measured by the real-time qpcr method. in this method, 𝜷-actin gene was used as a reference gene to normalize the gene expression data. to confirm the specificity of each primer, its melting curves were examined.results: electrophoresis of the pcr products showed the 60, 133, and 150-bp fragments for oval, ovm, and beta-actin, respectively. melting peaks analysis on the pcr products for all primers confirmed minimal primer-dimers and primer specificity. the results of the real-time qpcr method indicated that supplementation of vac fruits powder at levels 1 and 2 to the diet of laying hens has no effect on the expression of oval and ovm genes of laying hens in the second production cycle. conclusion: therefore, adding vac fruit powder to the diet of laying hens is not expected to increase egg production in laying hens. therefore, vac supplementation is not recommended to the diet of laying hens.