بهبود کیفیت اسپرم خروس طی نگهداری در دمای 4 درجه با افزودن کوئرستین به شکل نانو لیپوزوم و Nlc در محیط رقیق کننده

مقدمه و هدف: نرخ باروری پایی اسپرم منجمد طیور در مقایسه با دیگر گونه ها، یک چالش جدی برای تلقیح مصنوعی در گله‌های تجاری است. این چالش ممکن است با برخی ویژگی‌های فیزیولوژیکی اسپرم طیور مرتبط باشد. از طرف دیگر، تنش‌های اسمزی، شیمیایی و مکانیکی طی فرآیندهای سردسازی مهم‌ترین دلایلی هستند که باعث بوجود آمدن تغییرات فراساختاری، بیوشیمیایی و عملکردی در اسپرم می‌شوند که نتیجه آن مجموعه ای از پدیده های آبشاری است که منجر به کاهش باروری اسپرم خواهد شد. ﮐﻮﺋﺮﺳﺘﯿﻦ یک ﺗﺮﮐﯿﺐ زیست ﻓﻌﺎل ﺑﺎ منشا ﮔﯿﺎﻫﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ ﺑﺎ داﺷﺘﻦ ﺳﺎﺧﺘﻤﺎن ﺷﯿﻤﯿﺎیی ﭘﻠﯽ ﻓﻨﻠﯽ دارای ویژﮔﯽ آنتی اکسیدانی اﺳﺖ. این ﺗﺮﮐﯿﺐ بعنوان یک ﻓﻼوﻧﻮیید ﻣﻬﻢ و یک آنتی ‌اکسیدان ﻗﻮی ﺑﺎﻋﺚ ﺣﺬف رادیکال‌های آزاد و ﮐﺎﻫﺶ ﺗﻨﺶ اﮐﺴﯿﺪاﺗﯿﻮ در اﺳﭙﺮﻣﺎﺗﻮﮔﻮﻧﯽ جوجه‌ها ﺷﺪ. هدف از این مطالعه، استفاده از کوئرستین به شکل نانو در رقیق کننده اسپرم خروس طی نگهداری در دمای 4 درجه می‌باشد. مواد و روشها: بلافاصله پس از جمع‌آوری منی از خروس ها بررسی‌های اولیه صورت گرفت. منی جمع‌آوری شده از هر 15 خروس به منظور حذف اثرات فردی با یکدیگر مخلوط و به محیط رقیق‏ کننده اضافه شدند.. غلظت‌های مختلف کوئرستین (10، 15 و 20 میکرومولار) در سه شکل (غیرمحافظت شده و در داخل ساختارهای لیپوزومی و nlc) به ترکیب رقیق‌ کننده پایه اضافه شد. سپس سرد شدن تدریجی نمونه‏ های منی رقیق شده در دمای c ˚ 4 به مدت 3 ساعت انجام گردید. سپس در زمان‌های صفر (بلافاصله پس از رسیدن نمونه‌ها به دمای 4 درجه سانتیگراد)، 24 و 48  پارامترهای جنبایی، یکپارچگی غشایی، پراکسیداسیون لیپیدی، درصد اسپرم‌های غیر طبیعی و درصد زنده‌مانی نمونه ‏ها مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: نتایج بیانگر آن است که تیمارهای آزمایشی تاثیر معنی‌داری بر پارامترهای مورد ارزیابی در زمان صفر نداشته‌اند. در زمان 24 ساعت نگهداری در دمای 4 درجه، 15 میکرومولار ﮐﻮﺋﺮﺳﺘﯿﻦ لودشده در nlc باعث بهبود معنی‌دار پارامترهای جنبایی کل، پیش رونده، زنده‌مانی و یکپارچگی غشای اسپرم در مقایسه با گروه کنترل شد. در زمان 48 ساعت نگهداری در دمای 4 درجه تیمار 15 میکرومولارﮐﻮﺋﺮﺳﺘﯿﻦ لودشده در nlc باعث بهبود معنی‌دار پارامترهای جنبایی کل، پیش رونده، زنده‌مانی و یکپارچگی غشای اسپرم در مقایسه با گروه کنترل می شود. همچنین، نتایج بیانگر آن است که تیمارهای آزمایشی تاثیر معنی داری روی درصد ناهنجاری اسپرم خروس طی نگهداری در دمای 4 درجه در سه زمان 0، 24 و 48 ساعت در مقایسه با گروه کنترل نداشته است. در زمان‌های 24 و 48 ساعت نگهداری در دمای 4 درجه تیمار 15 میکرومولار ﮐﻮﺋﺮﺳﺘﯿﻦ لودشده در nlc باعث کاهش معنی‌دار میزان mda اسپرم در مقایسه با گروه کنترل شد. نتیجه گیری: نتایج این آزمایش نشان دهنده آن است که تیمار 15 میکرومولار ﮐﻮﺋﺮﺳﺘﯿﻦ لودشده در nlc باعث بهبود بسیاری از پارامترهای مورد ارزیابی میشود و بنابراین برای استفاده در رقیق‌کننده اسپرم خروس توصیه می شود.

improving the quality of rooster sperm during storage at 4 °c by adding quercetin in the form of nano-liposomes and nlc in a diluting medium

textended abstractintroduction and objective: the low fertility rate of frozen sperm of poultry compared to other species is a serious challenge for artificial insemination in commercial flocks. this challenge may be related to some physiological characteristics of poultry sperm. on the other hand, osmotic, chemical and mechanical stresses during cooling processes are the most important reasons that cause structural, biochemical and functional changes in sperm, which results in a series of cascade phenomena that will lead to a decrease in sperm fertility. quercetin is a bioactive compound with a plant origin, which has a polyphenolic chemical structure and has antioxidant properties. this composition, as an important flavonoid and a strong antioxidant, eliminates free radicals and reduces oxidative stress in chicken spermatogonia. the purpose of this study is to use quercetin in nano form in the diluent of rooster sperm during storage at 4 degrees.materials and methods: immediately after collecting semen from roosters, initial evaluations were done. semen collected from all 15 roosters were mixed together and added to the dilution medium in order to eliminate individual effects. different concentrations of quercetin (10, 15 and 20 μm) in three forms (unprotected and inside liposomal and nlc structures) added to base diluent composition. then the diluted semen samples were gradually cooled at 4°c for 3 hours. then, at time zero (immediately after the samples reach the temperature of 4°c), 24 and 48, the motility parameters, membrane integrity, lipid peroxidation, the percentage of abnormal sperms and the percentage of viability of the samples were evaluated.results: the results indicated that the experimental treatments did not have a significant effect on the evaluated parameters at zero time. during 24 hours of storage at 4 degrees, 15 μm of quercetin loaded in nlc significantly improved the parameters of sperm total motility, progressive motility, viability and integrity of sperm membrane compared to the control group. during 48 hours of storage at 4 degrees, the treatment of 15 μm quercetin loaded in nlc caused a significant improvement in the parameters of sperm total motility, progressive motility, viability and integrity of sperm membrane compared to the control group. also, the results showed that the experimental treatments did not have a significant effect on the abnormality percentage of rooster sperm during storage at 4 degrees in three times of 0, 24 and 48 hours. during 24 and 48 hours of storage at 4 degrees, the treatment of 15 μm quercetin loaded in nlc caused a significant decrease in sperm mda compared to the control group.conclusion: the results of this experiment show that the treatment of 15 μm quercetin loaded in nlc improves many evaluated parameters and therefore it is recommended for use in rooster sperm diluent.