اثر استفاده از سطوح مخلتف لوتئولین بر کاهش میزان مالون‌دی‌آلدهید و افزایش تحرک و زنده‌مانی اسپرم خروس راس 308 طی فرایند انجماد و یخ گشایی

مقدمه و هدف: استرس اکسیداتیو یک عامل مهم در عملکرد ضعیف اسپرم است که باعث تغییرات مورفولوژیکی، و آسیب اکسیداتیو می‌شود، پژوهش‌های مختلف نشان داده‌اند آنتی‌اکسیدان‌ها میتوانند تا حدودی از آسیب‌های اکسیداتیو طی انجماد بکاهند. درواقع آنتی‌اکسیدان‌ها باعث کاهش، حذف و غیر فعال‌سازی رادیکال‌های آزاد می‌شوند، بسیاری از ترکیبات نظیر برخی از عصاره‌های گیاهی، برخی مواد شیمیایی صنعتی و برخی از اسیدهای آمینه می‌توانند به‌عنوان آنتی‌اکسیدان فعالیت کرده و رادیکال‌های آزاد را در محیط خنثی کنند لوتئولین عضو مهمی از خانواده فلاونوئیدها است و به‌صورت گلیکوزیله در گیاهان وجود دارد و بر اساس مطالعات مشخص شده که لوتئولین دارای خواص آنتی‌اکسیدانی است. هدف از مطالعه حاضر کاهش میزان پراکسیداسیون لیپید و به حداقل رساندن تنش اکسیداتیو با افزودن سطوح مختلف لوتئولین در محیط انجمادی است.مواد و روش‌ها: نمونه‌های منی از 15 قطعه خروس در سن 28 هفتگی جمع‌آوری شدند. اسپرم گیری از خروس ها به روش مالش پشتیشکمی انجام گرفت. برای از بین بردن اثرات فردی پس از ارزیابی های اولیه، نمونه‌ها با هم مخلوط شدند و جهت اعمال برنامه های انجمادی مورد استفاده قرار گرفتند. پس از رقیق‌سازی نمونه‌ها و افزودن سطوح صفر (شاهد)، 0/25، 0/5، 0/75، 1 و 1/25 میکرومولار لوتئولین، به رقیق کننده ی پایه (لیک) اسپرم‌ها به نسبت 1:20 افزوده شدند. نمونه‌های مورد آزمایش در دمای °c4 سردسازی شده و سپس در داخل ازت مایع منجمد گردیدند. یخ گشایی نمونه‌ها در دمای 37 درجه سانتی‌گراد انجام گرفت و سپس فراسنجه‌های تحرک بوسیله سیستم کامپیوتری کاسا، زنده‌مانی با تست ایوزین نیگروزین، یکپارچگی غشای پلاسمایی با تست هاست، ریخت‌شناسی بوسیله تست هانکوک و میزان مالون‌دی‌آلدهید تولید شده اندازه گیری شد و سپس داده‌های حاصل در قالب طرح کاملا تصادفی آنالیز شد.یافته‌ها: نتایج به دست آمده نشان داد که افزودن سطوح 0/75 ، 1 و 1/25 میکرومول سبب افزایش معنی‌داری در تحرک کل و سطوح 0/75 و 1 باعث افزایش تحرک پیش‌رونده و vap شد. علاوه بر این سطح 1 میکرومول لوتئولین سبب افزایش معنی‌داری در فراسنجهvsl شد (0/05 >p). نتایج نشان داد که سطوح 0/75 و 1 میکرومول باعث افزایش معنی‌داری در زنده‌مانی و سلامت غشا شد و همچنین سطح 0/75 میکرومول لوتئولین باعث شد میزان مالون‌دی‌آلدهید و درصد اسپرم‌هایی با ریخت‌شناسی غیرطبیعی کاهش پیدا کند (0/05 >p).نتیجه‌گیری: نتایج این پژوهش نشان داد که افزودن لوتئولین در رقیق‌کننده طی انجماد و یخ گشایی می‌تواند تاثیر مثبتی در بهبود کیفیت اسپرم خروس داشته باشد و متعاقبا سبب افزایش تحرک کل و پیش‌رونده بعد از انجماد و یخ‌گشایی گردد و همینطور سطح 0/75 میکرومولار توانست بهترین عملکرد را در بین سطوح مختلف افزوده شده در رقیق کننده داشته باشد.

The Effect of using Different Levels of Luteolin on Reducing Malondialdehyde Content and Increasing the Motility and Viability of Ross 308 Rooster Sperm during Cryopreservation and Thawing Process

Extended AbstractIntroduction and Objective: Oxidative stress is an important factor in poor sperm function that causes morphological changes and oxidative damage. Various studies have shown that antioxidants can reduce oxidative damage during freezing. In fact, antioxidants reduce, eliminate, and inactivate free radicals. Many compounds, such as some plant extracts, some industrial chemicals, and some amino acids, can act as active antioxidants and neutralize free radicals. luteolin is an important member of flavonoids which is present in glycosylated form in plants and studies have shown that luteolin has antioxidant properties. The aim of this study was to reduce lipid peroxidation and minimize oxidative stress by adding different levels of luteolin in the freezing medium.Material and Methods: Semen samples were collected from 15 roosters at 28 weeks of age. Sperm collection from roosters was performed by backabdominal massage method. To eliminate individual effects after initial evaluations, the samples were mixed together and used for cryopreservation. After extending the samples and adding the levels of 0 (control), 0.25, 0.5, 0.75, 0.1 and 1.25 mu;M luteolin to the base extender (lake extender), sperm were added at 1:20 ratio. The test samples were cooled to 4 ° C and then frozen in liquid nitrogen. The samples were thawed at 37 ° C and then the motility parameters were measured by CASA computer system, survival by eosin nigrosine test, plasma membrane integrity by host test, morphology by Hancock test and the amount of produced malondialdehyde. Then the data were analyzed by completely randomized design.Results: The results showed that the addition of 0.75, 1 and 1.25 mu;M levels significantly increased the total motility and the levels of 0.75 and 1 increased the progressive mobility and VAP. In addition, 1 mu;M of luteolin caused a significant increase in VSL parameter (p <0.05). The results showed that levels of 0.75 and 1 mu;M significantly increased membrane integrity, and also level of 0.75 mu;M of luteolin decreased malondialdehyde content and sperm percentage with abnormal morphology (p <0.05).Conclusion: The results of this study showed that the addition of luteolin in the extender during freezing and thawing can have a positive effect on improving the quality of rooster sperm and subsequently increase the total and progressive motility after freezing and thawing and also the level of 0.75 mu;M could be the best performance among different levels added to the extender.