ارزیابی سرولوژی نمونه‌های اسب مشکوک به مشمشه با استفاده از وسترن بلات

مقدمه و هدف: بورخولدریا مالئی، عامل اتیولوژیک بیماری مشمشه است. تشخیص بالینی و باکتری‌شناسی مشمشه در مراحل اولیه بیماری دشوار است. برخی از روش‌ها مانند آزمایش ثبوت مکمل به دلیل سختی آزمایش و نتایج مثبت کاذب برای متخصصان دامپزشکی دردسرساز شده و موجب ضرر و زیان مالی صاحبان حیوانات می‌گردد. یکی دیگر از روش‌های تشخیصی آزمایش مالئیناسیون است که به پرسنل آموزش دیده نیاز دارد. بنابراین‌، برای تشخیص سریع و دقیق بیماری‌، به ویژه در مناطقی که نمی‌توان از حیوانات نگهداری کرد‌، باید از روش‌های جدید برای شناسایی بیماری استفاده کرد. وسترن بلات یک آزمایش تشخیصی سرولوژی است و توسط سازمان جهانی بهداشت حیوانات توصیه شده است. هدف از این مطالعه، طراحی روش وسترن بلات با استفاده از لیپوپلی ساکارید حاوی آنتی‌ژن بورخولدریا مالئی، بود.مواد و روش ها: در این مطالعه، تعداد 75 سرم از جمعیت مختلف اسب‌ها از چندین منطقه جغرافیایی ایران جمع‌ آوری شد. ویژگی و حساسیت تست‌های آزمایش ثبوت مکمل، الایزا و وسترن بلات برای تشخیص مششمه با استفاده از سرم‌های تهیه شده، مقایسه گردید. آزمایش الایزا بر‌اساس آنتی ژن‌های بورخولدریا مالئی و وسترن بلات با استفاده از آنتی ژن خالص شده بورخولدریا مالئی حاوی لیپوپلی ساکارید انجام گرفت.یافته‌ها: نتایج نشان داد که آزمون وسترن بلات و آزمون الایزا ویژگی بالاتری نسبت به آزمایش ثبوت مکمل داشتند. حساسیت روش الایزا بر اساس آنتی ژن‌های بورخولدریا مالئی در مقایسه با آزمایش ثبوت مکمل و آزمون وسترن بلات بالاتر بود. در نهایت حساسیت‌ و ویژگی به ترتیب‌ برای آزمایش ثبوت مکمل (92/31 % و 98/38%)، وسترن بلات (92/31 % ، %100) و الایزا (%100 و 100%) بدست آمد.نتیجه‌گیری: آزمایش ثبوت مکمل برای مشمشه هنوز روش تجویز شده سرولوژیکی برای اهداف تجاری به منظور تایید سلامت حیوانات از نظر بیماری است. اما به دلیل حفظ امنیت زیستی کلنی‌های ارزشمند و گران قیمت اسب که پرورش آنها توسط اسب داران حرفه‌ای در مناطق مختلف ایران رو به توسعه می‌باشد بر اهمیت اعمال دقیق‌تر و هوشمندانه برنامه کنترل و ریشه‌کنی بیماری و ارتقاء توانایی‌های آزمایشگاهی تشخیص بیماری می‌افزاید تا امکان شناخت بهتر عامل بیماری و استفاده و بهینه سازی روش‌های تشخیصی مشمشه در کشور فراهم گردد. بنابراین‌، تلاش برای بهبود و بهینه سازی بیشتر الایزا و وسترن بلات می بایست ادامه یابد.

Serological Evaluation of Horse Specimens Suspected of Glanders using Western Blot

Extended AbstractIntroduction and Objective: Burkholderia mallei, is the etiologic agent of the glanders disease. Clinical and bacteriological diagnosis of glanders is difficult in the early stages of the disease. Some methods such as Complement fixation test (CFT) due to false positive results and troublesome for veterinary authorities and cause financial losses to animal owners, The other one is Malleination test, which requires appropriate equipment and efficient laboratory personnel. Therefore, in order to quickly and accurately diagnose the disease, especially in areas that cannot be kept animals, new methods should be used to identify the disease. The Western blot is a serological diagnostic test and has been recommended by the World Organization for Animal Health (OIE). In this study, a Western blot assay making use of a purified lipopolysaccharide (LPS) containing antigen of Burkholderia mallei was designated. Material and Methods: in this study, a total of 75 sera were collected from different horse populations from several geographical areas of Iran. Specificity and sensitivity of the Complement fixation test, ELISA and a Western blot were compared for serodiagnosis of glanders. ELISA test was based on B. mallei antigens and Western blot made use of a purified LPScontaining B. malleiantigen. Results: The Western blot and ELISA, were more specific than the Complement fixation test. ELISA based on B. mallei antigens had more sensitivity compared to Complement fixation test and Western blot. Finally, sensitivity and specificity were obtained for Complement fixation test (92.31% and 98.38%), Western blot (92.31%, 100%) and (100% and 100%) respectively.Conclusion: Complement fixation test for glanders is still the prescribed serological method for commercial purposes, which is used to confirm the health of animals. However, in order to maintain the biosafety of valuable and expensive horse colonies, it is important to implement a more accurate and intelligent disease control and eradication program. This enhances the laboratory diagnostic capabilities to better understand the cause of the disease and to use and optimize the diagnostic methods of glanders in the country. Therefore, efforts to further improve and optimize ELISA and Western blotting should be continue.