تاثیر مقادیر مختلف آنتی‌اکسیدان 4،2-دی‌نیتروفنول و لوتئولین بر کیفیت منی خروس طی فرایند انجماد-یخ‌گشایی

مقدمه و هدف: طی انجماد اسپرم تولید گونه‌های فعال اکسیژن و کاهش فعالیت آنتی‌اکسیدانی، موجب آسیب به ساختار‌های عملکردی اسپرم می‌شود. بیشترین تنش به دلیل تولید فراوان گونه‌های فعال اکسیژن و عدم نفوذپذیری آنتی‌اکسیدان‌ها به داخل میتوکندری، متوجه این اندامک می شود. در این مطالعه اثرات افزودن 4 سطح ترکیبی از آنتی‌اکسیدان 4،2دی‌نیتروفنول که یک آنتی‌اکسیدان هدفمند میتوکندریایی است و لوتئولین که از قوی ترین ترکیبات فلاونوییدی با خاصیت آنتی‌اکسیدانی و ضدمیکروبی را دارد، در رقیق کننده لیک بر پایه لسیتین مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش‌ها: بدین منظور نمونه‌های منی از 15 خروس سویه راس با سن 28 هفته به روش مالش پشتیشکمی جمع آوری شدند. نمونه‌های منی پس از ارزیابی اولیه باهم مخلوط و پس از رقیق سازی و افزودن سطوح مختلفی به ترتیب تیمار 1 (0/5 نانومولار 4،2دی‌نیتروفنول + 0/75 میکرومولار لوتئولین)، تیمار 2 (0/5 نانومولار 4،2دی‌نیتروفنول + 1 میکرومولار لوتئولین)، تیمار 3 (0/75 نانومولار 4،2دی‌نیتروفنول + 0/75 میکرومولار لوتئولین)، تیمار 4 (0/75 نانومولار 4،2دی‌نیتروفنول + 1 میکرومولار لوتئولین) از آنتی‌اکسیدان‌ها، نمونه ها ابتدا برای تعادل دمایی در دمای 4 درجه سانتی‌گراد بمدت 2 ساعت نگهداری شده و پس از لود شدن در پایوت‌های 0/25 میلی‌لیتری در فاصله 7 سانتی‌متری بوسیله بخار ازت منجمد و سپس در داخل ازت مایع غوطه‌ور شدند. پس از یخ گشایی، نمونه‌ها از نظر فراسنجه های عملکردی و بیوشیمیایی اسپرم مورد ارزیابی قرار گرفتند. یافته‌ها: نتایج پژوهش حاضر نشان دادند که افزودن تیمار‌های 2 و 3 به رقیق کننده لیک طی انجماد و یخ‌گشایی اسپرم خروس باعث افزایش معنی‌دار فراسنجه‌های تحرک کل و حرکت پیش‌رونده گردید و همینطور تیمار 3 سبب افزایش معنی‌دار سرعت اسپرم در خط مستقیم و معیار مستقیم بودن حرکت اسپرم نیز شد، تیمار 2 و 3 زنده‌مانی را نیز بصورت معنی‌داری نسبت به گروه شاهد افزایش داد و سبب کاهش میزان مالون‌دی‌آلدهید مایع منی و اسپرم‌های با ریخت‌شناسی غیر طبیعی طی انجماد و یخ‌گشایی شد (0/05>p) همینطور تیمار 3 توانست میزان یکپارچگی غشا پلاسمایی نسبت به گروه کنترل افزایش بدهد (0/05>p). نتیجه‌گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که استفاده ترکیبی این دو آنتی‌اکسیدان سبب هم‌افزایی خاصیت هر دو آنتی‌اکسیدان شده و سبب بهبود فراسنجه‌های کیفی و کمی اسپرم خروس طی مرحله انجماد و یخ‌گشایی شده است.

Effect of Different Levels of 2, 4 Dinitrophenol and Luteolin on Semen Quality of Rooster during Freezing-Thawing Process

Extended AbstractIntroduction and Objective: During sperm freezing, the production of reactive oxygen species and the reduction of antioxidant activity cause damage to sperm. Most of the stress is due to the high production of reactive oxygen species and the impermeability of antioxidants to mitochondria. In this study, the effects of four levels of a combination of 2, 4 dinitrophenol which is a targeted mitochondrial antioxidant and Luteolin antioxidants, which are among the strongest flavonoid compounds with antioxidant and antimicrobial properties, were evaluated in lecithinbased Lake Extender. Material and Methods: For this purpose, semen samples from 15 roosters were collected by dorsoabdominal massage method. Semen samples are mixed together after initial evaluation after diluting and adding different levels, treatment 1 (0.5 nanomolar 2, 4 dinitrophenol + 0.75 micromolar Luteolin), treatment 2 (0.5 nanomolar 2, 4 dinitrophenol + 1 micromolar Luteolin), treatment 3 (0.75 nanomolar 2, 4 dinitrophenol + 0.75 micromolar Luteolin) and treatment 4 (0.75 nanomolar 2, 4 dinitrophenol + 1 micromolar Luteolin), of antioxidants, samples were frozen by nitrogen vapor. After thawing, the samples were evaluated for sperm performance parameters. Results: The results of the present study showed that the addition of treatments 2 and 3 to the leak diluent during freezing and thawing of rooster sperm significantly increased the parameters of total motility and progressive movement and also treatment 3 significantly increased sperm velocity in a straight line and the criterion of direct sperm motility. Also, treatments 2 and 3 significantly increased survival compared to the control group and reduced the amount of semen malondialdehyde and sperm with abnormal morphology during freezing and thawing (p<0.05). Also, treatment 3 was able to increase membrane integrity. Plasma increase compared to the control group (p<0.05).Conclusion: The results of the present study show that the combined use of these two antioxidants has increased the properties of both antioxidants and improved the quality and quantity of sperm.