ارزیابی توانایی تکوین برون تنی تخمک و بیان میکرو Rna های سلول های کومولوس گوسفند در پاسخ به اثرات التهاب زایی لیپوپلی‌ساکارید

این مطالعه به منظور بررسی تاثیر لیپوپلی ساکارید بر بلوغ، توانایی تکوین تخمک و تغییر بیان میکروrna های سلول های کومولوس در شرایط التهاب ناشی از لیپوپلی ساکارید انجام شد. برای این منظور تخمک ها با غلظت های صفر (شاهد) و یک میکروگرم در میلی لیتر از لیپوپلی ساکارید به مدت 24 ساعت کشت داده شدند. بعد از بلوغ برون تنی، درصد بلوغ هسته و پراکندگی سلول های کومولوس بررسی شد. همچنین درصد تسهیم و تولید بلاستوسیست محاسبه شد. تعیین میزان بیان میکروrna ها به روش کمّی به وسیله دستگاه real time pcr مورد ارزیابی قرار گرفت. افزودن یک میکروگرم در میلی لیتر لیپوپلی ساکارید به محیط کشت بلوغ هیچ تاثیر معنی داری بر درصد بلوغ هسته و پراکندگی سلول های کومولوس نداشت. درصد تسهیم هیچ تفاوتی با گروه شاهد نداشت اما درصد تولید بلاستوسیست به طور معنی داری در حضور لیپوپلی ساکارید کاهش پیدا کرد (05/0p<). آنالیز pcr نشان داد که در محیط حاوی لیپوپلی ساکارید در مقایسه با گروه شاهد بیان میکروrnaهای mir200b،mir27a ، mirlet7a در سلول های کومولوس گوسفند به ترتیب، افزایش، افزایش، کاهش یافت هر چند تفاوت معنی دار نبود و تنها mir150به طور معنی داری با افزایش لیپوپلی ساکارید در محیط افزایش پیدا کرد (0/05>p). بر طبق نتایج به دست آمده، لیپوپلی ساکارید اثر منفی بر توانایی تکوین تخمک های میش دارد و این اثرات از طریق تاثیر بر بیان میکروrna‌های سلول های کومولوس می باشد.

Evaluating the Sheep Oocyte In Vitro Developmental Competence and Expression of MicrorRNAs in Cumulus Cells in Response to Inflammatory Effects Induced by Lipopolysaccharide

This study was conducted to investigate the influence of lipopolysaccharide (LPS) on sheep oocyte maturation and developmental competence and changes in the expression of microRNAs in cumulus cells in the inflammatory situations induced by LPS. For this, ewechr('39')s oocytes were cultured in medium containing 0 (control) and 1 micro;g/ml of LPS for 24 hours. After in vitro maturation, the percentage of nucleus maturation and distribution of cumulus cells were evaluated. Moreover, the rate of cleavage and blastocyst production were evaluated. The expression of microRNAs was quantitatively assessed by realtime PCR. The addition of LPS to maturation medium did not show any significant effects on the proportion of nucleus maturation and cumulus cell distribution. Although percentage of cleavage was not affected by LPS, the rate of blastocyst production was significantly reduced in the presence of LPS (P < 0.05). Expression of Mir150 was significantly increased in response to LPS supplementation in culture medium (P < 0.05). Also, the expression of Mir200b and Mir27a increased in culture medium containing LPS compering to the control group, whereas Mirlet7a expression decreased in response to LPS addition, however, the difference was not statistically significant. The results demonstrate that LPS has detrimental effects on sheep oocyte developmental competence and these effects seem to be mediated through changes in the expression of microRNAs in cumulus cells.