استفاده از ژله رویال به عنوان جایگزین سرم گاوی در کشت برون‌تنی رویان بز با تاکید بر بیان ژن های درگیر در مرگ سلولی

پژوهش حاضر به منظور بررسی استفاده از غلظت های متفاوت ژله رویال به عنوان جایگزین سرم در کشت برون تنی رویان بز با تاکید بر بیان ژن های درگیر در مرگ سلولی انجام شد. بلوغ برون تنی اووسایت در معرض غلظت های 10 درصد fbs (محیط پایه)، 10 میلی گرم بر میلی لیتر ژله رویال (بدون سرم)، 5 درصد fbs + 5 میلی گرم بر میلی لیتر ژله رویال، 5/2 درصد fbs + 5/7 میلی گرم بر میلی لیتر ژله رویال و 7.5 درصد fbs + 2.5 میلی گرم بر میلی لیتر ژله رویال انجام شد. پس از 24 ساعت، اووسایت ها به مرحله متافاز میوز ii (اووسایت بالغ) رسیدند و بیان نسبی ژن های مورد نظر در اووسایت نیز اندازه گیری شد. اووسایت های بالغ به صورت لقاح برون تنی و توسط اسپرم های بارور تلقیح و نرخ کلیواژ و نرخ بلاستوسیست نیز اندازه گیری شد. نتایج ما نشان داد که درصد بلوغ برون تنی، درصد کلیواژ و رویان برون تنی با افزایش تدریجی غلظت ژله رویال به طور معنی داری از تیمار شاهد بیشتر شد (p<0/05)، به صورتی که تیمار دارای 10 میلی گرم بر میلی لیتر ژله رویال، بیشترین درصد بلوغ برون تنی اووسایت بز( 91.35 درصد)، بیشترین درصد کلیواژ (83.39 درصد)، و بیشترین درصد بلاستوسیست (30.18 درصد) را نسبت به گروه شاهد (71.31، 62.50 و 21.42 درصد؛ به ترتیب) دارا بود. افزایش غلظت ژله رویال و جایگزینی آن به جای fbs بیان نسبی ژن bcl2 را افزایش داد p<0/05 در حالیکه منجربه کاهش معنی داری بیان نسبی ژن bax شد. نسبت bcl2/bax نیز افزایش معنی داری p<0/05 متناسب با افزایش غلظت ژله رویال داشت. تفاوت معنی داری بین تیمار ها در بیان نسبی ژن caspase3 دیده نشد. بر اساس یافته های این پژوهش می توان نتیجه گرفت که افزایش غلظت ژل رویال به جای سرم جنین گاو در محیط بلوغ برون تنی اووسایت توانست شرایط تکامل و تولید رویان برون تنی بز را بهبود دهد.

The use of Royal Jelly as a Replacement of Fetal Bovine Serum in In Vitro Production of Goat Embryo with Emphasis on Apoptosis Related Genes

The present study was conducted to investigate the effect of different concentrations of royal jelly as a fetal bovine serum replacement on in vitro embryo production of goat oocytes and the gene expression involved in apoptosis. In vitro maturation (IVM) of oocyte was performed in the presence of control (10% FBS), 10 mg/ml RJ (without FBS), 5% FBS and 5 mg/ml RJ, 2.5% FBS and 7.5 mg/ml RJ, 7.5% FBS and 2.5 mg/ml RJ. Nuclear statusof matured oocyte and mRNA abundance of selected genes were evaluated following 24 h of IVM. Following the IVM, fertilization and embryo culture were carried out in all groups and embryonic development was examined. Our data suggested that the number of oocytes at metaphase II stage, cleavage and blastocyst stage of the embryo were gradually increased followed by the dose of royal jelly gradually increased in the maturation medium. The addition of 10 mg/ml royal jelly to the maturation media was significantly increased (P <0.05) maturation rate (91.35%) of goat oocyte, cleavage (83.39%) and blastocyst formation (30.18%) compared with the control groups (71.31%, 62.50% and 21.42%, respectively). By increasing of royal jelly concentrations, the mRNA transcript of the BCL2 gene was increased, while transcript abundance of BAX was significantly decreased. BCL2/BAX ratio has also been significantly increased (P <0.05) by increasing of royal jelly concentrations in the maturation media. However, relative gene expression of CASPAS3 gene was not significantly different between treatments. It seems that the gradual increase of royal jelly as a replacement of FBS in the maturation media had a desirable effect on oocyte maturation and the embryo development condition of caprine oocyte.