isolation and characterization of indigenous endotoxin-forming bacillus sp. with insecticidal activity from northern iranian soil

The main goal of the current study was to isolate and characterize endosporeforming soil bacteria that produce parasporal crystalline proteins against larvae of lepidoptera insects during stationary phase of growth. two different methods were applied for the isolation of sporeforming strains. polymerase chain reaction (pcr) was used for the characterization of cry gene content of the isolated strains and 16s rrna sequencing was carried out to identify bacterial strains. efficiency of the isolates as insecticide was evaluated in a bioassay experiment using insectchr('39')s larvae. regarding presence of parasporal inclusion crystals and sdspage patterns, 10 bacterial strains were isolated from about 200 soil samples. analysis of crystalspore mixtures with sdspage showed a broad range of proteins with molecular weight between 11230 kda. data from pcr analysis indicated that only two isolates (ripi6 and ripi18) may contain cry3 gene. isolate ripi21 and reference strain (bacillus thuringiensis subsp. kurstaki) were positive for cry1 gene. 16s rrna gene sequences of all isolates showed at least 96% sequence match with b. thuringiensis strains deposited in the genbank. the results of bioassay experiments showed the efficacy of strains ripi7, 10 and 22 on killing of larvae of both anagasta kuehniella zeller and plutella xylostella curt. it is concluded that there are some bacterial candidates for biological control of major agricultural pests in north of iran.

جداسازی و تعیین خصوصیات باسیلوس های تولید کننده اندوتوکسین های حشره کش از خاک شمال ایران

هدف اصلی از انجام این مطالعه، جداسازی و تعیین خصوصیات آن دسته از باکتری های اسپورزای خاک می باشد که طی فاز سکون می توانند پروتئین های کریستالی پارااسپورال علیه لارو فلس بالان تولید کنند. دو روش مختلف برای جداسازی سویه های اسپورزا مورد استفاده قرار گرفت. از واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) برای شناسایی محتوای ژن های cry در سویه های جداسازی شده و از روش تعیین ترادف 16S rRNA برای شناسایی سویه های باکتریایی استفاده شد. کارایی سویه ها بعنوان حشره کش در یک آزمون زیست سنجی با استفاده از لارو حشرات انجام شد. با توجه به وجود کریستال های ذخیره ای و الگوهای الکتروفورزی (SDSPAGE) ، ده سویه باکتریایی از 200 نمونه خاک جداسازی شد. آنالیز مخلوط های کریستالاسپور با کمک SDSPAGE طیف وسیعی از پروتئین ها با وزن مولکولی بین 11 تا 230 کیلودالتون را نشان داد. داده های آنالیز PCR نشان داد که فقط دو سویه RIPI6 و RIPI18 واجد ژن cry3 می باشند. همچنین، فقط سویه های RIPI21 و شاهد (باسیلوس تورنجیینسیس کورستاکی) واجد ژن cry1 بودند. ترادف یابی ژن های 16S rRNA تمام سویه های جداسازی شده وجود یک انطباق حداقل 96 درصدی با سویه های باسیلوس تورنجیینسیس ثبت شده در بانک ژنی را نشان داد. نتایج آزمون های زیست سنجی نشان دهنده کارایی سویه های RIPI7, 10 , 22 در کشتن لاروهای Anagasta kuehniella و Plutella xylostella بود. به طور خلاصه می توان گفت که برای کنترل بیولوژیک آفات گیاهی در شمال ایران می توان برخی از گزینه های باکتریایی را نیز مورد توجه قرار داد.