شناسایی چندشکلی ژن fecb در گوسفند با استفاده از روش سریع و کم هزینه tetra-arms pcr

ژن fecb یکی از ژن های بزرگ اثر در ارتباط با صفت دوقلوزایی درگوسفند است. برای شناسایی ژن fecb از آنزیم avaii دارای جایگاه برشی جهش ژن fecb در روش pcr-rflp استفاده می شود. استفاده از این آنزیم بدلیل سمی بودن ژل اکریل آمید و گران بودن آن مقرون به صرفه نمی باشد. بنابراین، این پژوهش به منظور طراحی آغازگرهای اختصاصی جهت شناسایی سریع و کم هزینه ژن fecb انجام شده است. تکنیک tetra arms pcr، باعث حذف آنزیم avaii ، جایگزینی ژل ایمن آگارز با ژل اکریل آمید، صرفه جویی در هزینه و زمان لازم برای تعیین ژنوتیپ می شود. چهارآغازگر براساس روشtetra arms pcr طراحی شد. این آغازگرها بر روی 3000 نمونه آزمایش شدند. بعد از انجام pcr و الکتروفورز، سه قطعه به طول 108، 213 و 276 جفت باز تکثیر و در نهایت سه ژنوتیپ برای ژن fecb مشاهده گردید. به منظور اعتبار سنجی آغازگرهای طراحی شده، 20 نمونه بصورت تصادفی برای توالی یابی ارسال شد. پس از اعتبارسنجی، نتایج تعیین ژنوتیپ شده با استفاده از آغازگرهای بهینه شده ی روش tetra arms pcr با روش pcr-rflp مطابقت کامل داشت. این روش برای تشخیص ژن fecb در تعداد زیادی از نمونه ها، سریع و مقرون به صرفه است و می تواند جایگزین روش پر هزینه هضم آنزیمی شود.

detection of fecb gene polymorphisms in sheep using rapid and low-cost tetra-arms pcr

the fecb gene is one one of the major genes associated with the twinning trait in sheep. avaii enzyme has a restriction site containing fecb gene mutation is used for genotyping by pcr-rflp method. due to toxicity and expensive price, using this enzyme is not considered reasonable and economical. so, this research was performed to design specific primers for rapid and economical detection of fecb gene. tetra arms pcr technique, caucuses elimination of avaii enzyme, replacement of acrylamide gel by safe agarose gel, and of course saving time and money for genotyping. four primers were designed, based of tetra arms pcr method, and were tested on 3000 samples. after pcr and electrophoresis, three fragments with a length of 108, 213 and 276 bp were amplified and finally three genotypes were observed for fecb gene. in order to validate the designed primers, 20 samples were randomly sequenced. after validation, the result of this research indicates that the final obtained genotype in tetra arms pcr method is same as the results from pcr-rflp method. tetra arms pcr method is rapid and economical for detection of fecb in a larger number of samples and can replace by enzyme digestion method which is all of more expensive.