تاثیر igf-i بر قابلیت کلونی‌زایی، زنده‌مانی و بیان ژن‌های وابسته به آپوپتوزیس در سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند

هدف از این مطالعه بررسی اثر igf-i بر تعداد کلونی‌ها، مساحت کلونی‌ها، میزان زنده‌مانی و بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوزیس در سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند بوده است. در این پژوهش سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی موجود در غشاء پایه لوله‌های منی‌ساز از بیضه گوسفند نژاد افشاری با استفاده از مراحل هضم آنزیمی جداسازی شدند. گروه شاهد igf-i دریافت نکرد و چهار گروه بعدی به ترتیب چهار غلظت‌ 0.1، 1، 5 و 10 میکروگرم در میلی‌لیتر igf-i را دریافت نمودند. سلول‌ها به مدت دو هفته کشت داده شدند و میزان کلونیزاسیون از نظر تعداد و مساحت در روزهای پنجم و چهاردهم کشت ارزیابی شد. پس از پایان دوره کشت میزان بروز آپوپتوزیس و بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوزیس (bax و bcl2) نیز ارزیابی شد. نتایج نشان داد که استفاده از تیمارهای 5 و 10 میکروگرم در میلی‌لیتر igf-i موجب بهبود میزان کلونی‌زایی از نظر تعداد و مساحت در روزهای پنجم و چهاردهم کشت نسبت به سایر گروه‌ها شد (0.05≥p). بیشترین میزان زنده‌مانی و کمترین سطح آپوپتوزیس در گروه‌های دریافت کننده 5 و 10 میکروگرم در میلی‌لیتر igf-i مشاهده شد (0.05≥p). بیشترین بیان ژن bcl2 و کمترین بیان ژن bax نیز در گروه‌های دریافت کننده 5 و 10 میکروگرم در میلی‌لیتر igf-i مشاهده شد (0.05≥p). بنابراین استفاده از دوز مناسب igf-i در محیط کشت می‌تواند روشی موثر در راستای بهبود کیفیت و زنده‌مانی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند طی مطالعات بر روی سلول‌های بنیادی باشد.

effect of igf-i on the colonizing ability, viability and apoptosis related genes expression in sheep’s spermatogonial stem cells

this study was conducted to evaluate the effect of igf-i on the number and area of colonies, viability and apoptosis related genes expression in sheep’s spermatogonial stem cells (sscs). in this study, sscs at the basal membrane of seminiferous tubules were isolated from testes of afshari sheep using enzymatic digestion steps. the control group did not receive igf-i and the other groups received 0.1, 1, 5 and 10 μg/ml igf-i, respectively. the cells were cultured for 2 weeks and the colonizing abilities were evaluated on the 5th and 14th days of culture. at the end of culturing period, apoptosis status and apoptosis related genes expression (bax and bcl2) were evaluated. the results showed using 5 and 10 μg/ml igf-i improved colonizing abilities on the 5th and 14th days compared to the other groups (p≤0.05). the highest viability and lowest apoptosis status was observed in groups received 5 and 10 μg/ml igf-i (p≤0.05). the highest bcl2 expression and lowest bax expression was observed in groups received 5 and 10 μg/ml igf-i (p≤0.05). therefore, using suitable dose of igf-i in culture medium could be an effective method to improve the quality and viability of sheep’s sscs during studying on stem cells.