طراحى سیستم الایزا جهت سنجش پادتن تولید شده در خوکچه هندى ایمن شده با ویروس تب‌برفکى

تب‌برفکی، بیماری عفونی و کشنده ویروسی است که موجب بیمار شدن حیوانات زوج سم می‌شود. در حال حاضر از روش‌ خنثی‌سازی سرم برای مطالعه این بیماری استفاده می‌شود، اما تست الایزا بر‌اساس انواع متمایز با پادگن‌های مختلف و پادتن اختصاصی در زمینه‌های مختلف مطالعه بیماری تب‌برفکی برتری دارد و ممکن است این روش در آینده نزدیک جایگزین روش‌های سنتی گردد. این مطالعه به منظور طراحی سیستم الایزا برای اندازه‌گیری پادتن تولید شده در خوکچه‌های هندی ایمن شده با ویروس تب‌برفکی انجام گرفت. ویروس تب‌برفکی تخلیص شده تهیه شد و محلول حاوی ویروس، پروتئین سنجی گردید. ایمن‌سازی پنج خوکچه‌ هندی جهت تهیه سرم مثبت انجام گرفت و سپس از آن‌ها جهت به دست آوردن سرم، خون‌گیری شد. آزمون ‌اکترلونی صورت گرفت و در نهایت اقدام به طراحی سیستم الایزا شد. غلظت پروتئین،‌ mlerror! bookmark not defined./ mg3.5 بدست آمد. با انجام تست اکترلونی، خطوط رسوبی میان سرم و پادگن ویروس تب‌برفکی تشکیل گردید. با استفاده از سیستم الایزای طراحی شده و با بهینه کردن شرایط، مقدار غلظت بهینه پادگن به میزان µg/well 1 و رقت مناسب سرمی به میزان 1:100 بدست آمد. در سیستم الایزا میزان انحراف معیار 0.35 و حد آستانه مقدار 1.03 تعریف شد، به طوری که نمونه‌های بالاتر از جذب نوری 1.03 نمونه‌های مثبت و نمونه‌های پائین‌تر از جذب نوری 1.03 نمونه‌های منفی بودند. آزمون الایزای طراحی شده می‌تواند برای سنجش پادتن تولید شده در خوکچه هندى ایمن شده با ویروس تب‌برفکى استفاده گردد که به‌ نوبه خود در درمان با به‌کارگیری روش‌های آزمایشگاهی کم هزینه و مناسب موثر است.

Designing an ELISA system to measure the antibody produced in guinea pigs immunized with FMD virus

Footandmouth (FMD) disease is an infectious and fatal viral disease that affects clovenhoofed animals. Although different biological and serological approaches are still applied to study this disease, ELISA test based on the distinct format, antigen type and specific antibody reinforce its predominance in different research areas of FMD, and this may replace the traditional methods in the near future. This study was conducted to design an ELISA system to measure the antibody produced in guinea pigs immunized with FMD virus. The purified FMD virus was obtained and then protein concentration of FMD solution was measured. Immunization of 5 guinea pigs was done and then blood sample was taken for obtaining serum. Ouchterlony test was used and finally the ELISA system was designed. Protein concentration was 3.5 mg/ml. By conducting ouchterlony test, the sediment lines between the serum and the antigen of the FMD virus were formed. Using ELISA and optimizing the conditions, the optimal concentration of antigen was 1 μg/well and a serum dilution of 1: 100 was achieved. In the ELISA system, the standard deviation was 0.35 and the cutoff value was 1.03, So that, the samples above absorbance of 1.03 are positive and the samples less than absorbance of 1.03 are negative. The in house ELISA can be used to measure the antibody produced in guinea pigs immunized with FMD virus, which can using for suitable and cost effective laboratory diagnostic tests.