پایش ژنتیکی جایگاه‌های ایمونوژنتیک کمپلکس سازگاری بافتی کلاس-1 در موش‌های balb/c

آزمایش‌‌های کنترل کیفیت ژنتیک حیوانات آزمایشگاهی از فرآیندهای مهم تولید و پرورش حیوانات آزمایشگاهی است. هدف این پژوهش، پایش ژنتیکی جایگاه‌‌های ایمونوژنتیکی h2kو h2dدر موش‌‌های همخون balb/c مورد استفاده در ایران بود. در این آزمایش، بر اساس استاندارد felasa از بافت طحال تعداد 30 سر موش balb/c (15 نر و 15 ماده) نمونه‌برداری شد. سپس با استفاده از کیت‌‌های اختصاصی استخراج rna و سنتز cdna انجام شد. برای تعیین وضعیت ژنتیکی مارکرهای مد نظر، به‌‌ترتیب قطعات 820 و 295 جفت بازی از توالی ژن کد‌‌کننده‌‌ی h2d و h2k با روش pcr و پرایمرهای اختصاصی تکثیر شد. تفاوت‌‌های نوکلئوتیدی در قطعات تکثیر شده نسبت به توالی مرجع، وجه تمایز بین آلل‌‌ها و هاپلوتایپ‌‌های مختلف قرار گرفت. توالی نمونه‌‌های مورد آزمایش با استفاده از روش توالی‌‌یابی سنگر تعیین و پس از پیرایش اولیه و مقایسه با آلل‌‌های استاندارد موش نژاد balb/c، وضعیت ژنتیکی برای مارکرهای مورد آزمایش تعیین شد. نتایج نشان داد که از تعداد 30 سر موش مورد آزمایش، تعداد 25 سر در جایگاه h2k  دارای آلل d (آلل استاندارد موش balb/c) بود، یک سر موش آلل d جهش یافته و 4 سر دارای آلل k بودند. همچنین از کل نمونه‌‌ها، تعداد 25 سر در جایگاه h2d دارای آلل d منطبق با توالی مرجع بودند. در این جایگاه، تعداد 3 سر موش آلل d جهش یافته و 2 سر آلل غیر از d داشتند. بین موش‌‌های نر و ماده از نظر فراوانی آلودگی ژنتیکی تفاوتی وجود نداشت (0.05

Genetic monitoring of immunegentic classI major histocompatibility complex loci in BALB/c mice

Genetic quality control test is one of most important procedures in laboratory animal breeding. This study was aimed to monitor two immunogenic loci, H2D and H2K, in BALB/c inbred mouse strain. In this study, according to the FELASA recommendations, a total of 30 mice (15 male and 15 female) were randomly selected from the BALB/c colony. The animals were euthanized by KetamineRampon, and the spleen tissue samples collected under sterile condition. Thereafter, total RNA was extracted and cDNA was synthezed using specific kites. In the current study, two DNA segments of 295 and 820 pb from H2K and H2D loci were amplified using specific primers and PCR method, respectively. The nucleoid differences between the sequenced samples were considered to identify alleles and haplotypes. The nucleoid sequences were determined using Sanger method and the primed sequences were then aligned and compared with the standard sequence of the BALB/c sequence as the reference. Results showed that 25 mice of 30 sampled mice had d allele in H2K loci. In addition, four mice had sequences associated with k allele and one mouse showed mutantd allele. Also, 25 mice of the 30 sampled mice showed complete identity with the d allele as the reference of H2D BALB/c allele. However, three mice showed mutantd allele, while the sequence of two mice did not show identity with d alleles. Moreover, among 30 investigated mice, 25 mice showed standard d haplotype of BALB/c strain. There was no significant difference between male and female mice regarding genetic contamination (P<0.05). These finding show that about 17% genetic contamination in the H2K and H2D loci of BALB/c colony which is probably related to single nucleotide mutation or uncontrolled mating. In conclusion, the results of the present study showed that approximately 83% of the BALB/c mice colonies were pure in H2K and H2D immunogenic loci.