طراحی یک روش الایزای غیرمستقیم جهت عیار سنجی آنتی توکسین بتا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ c در سرم خرگوش

کلستریدیوم پرفرینجنز عامل بیماری انتروتوکسمی می باشد که با ضرر و زیان شدید اقتصادی همراه است. ارزیابی ایمنی ناشی از واکسن در پیش گیری از این بیماری از اهمیت خاصی برخوردار است که به روش سرم نوترالیزاسیون انجام می شود. ولی به دلیل معایب آن، روش جایگزین الایزا در این طرح پیشنهاد گردید. در این تحقیق، پس از تهیه توکسین بتا و تخلیص آن، مقدار mld و غلظت پروتئین آن به روش لوری محاسبه گردید. همچنین آنتی سرم کنترل مثبت، کنترل منفی و آنتی سرم از نمونه ها آماده سازی گردید. سپس آزمون الایزا (درون شیشه) و پتنسی (سرم نوترالیزاسیون) (درون تنی) به موازات هم انجام و نتایج با نرم افزار spss آنالیز گردید. میزان cut off کنترل منفی در آزمون الایزا 435/ 0 برآورد شد و در آزمون کراس مشخص گردید که الایزا برای شناسایی توکسین بتا اختصاصی عمل می نماید و میزان تکرار پذیری آن با استفاده از انحراف معیار ارزیابی گردید (برای نمونه حد متوسط 033/ 0 = sd و 25/ 7 = cv). نتایج این بررسی نشان داد ارتباط معنی داری از نظر آماری بین دو آزمون درون تنی و درون شیشه، در نمونه‌ سرم‌ خرگوشهای واکسینه با واکسن انتروتوکسمی وجود دارد. آنالیز رگرسیون خطی، همبستگی 84/ 0 با 01/ 0≥p را نشان داد. حساسیت، ارزش پیشگویی مثبت و منفی آزمون الایزا در این نمونه ها به ترتیب 100٪، 21/ 84 و 100٪ محاسبه گردید. در نهایت پیشنهاد گردید از الایزا به عنوان جایگزین تست سرم نوترالیزاسیون برای ارزیابی واکسن انتروتوکسمی در خرگوش استفاده نمود. اگرچه برای استفاده در حیوانات هدف نیاز به تحقیقات بیشتر در این زمینه ضروری می باشد.

designing of an indirect elisa method for the detection of beta antitoxin of clostridium perfringens type c in rabbit serum

clostridium perfringens is the causative agent of enterotoxaemia, which is related to severe economic losses. the evaluation of immunity of beta antitoxin, that prevented animals against the disease, is measured using potency (serum neutralization) technique that it has disadvantages. so enzymelinked immunosorbent assay (elisa) has been proposed as an alternative to sn. in this research, before and after purification of beta toxin, mld and amount of protein was measured using lowry method. then, positive and negative control antiserum and samples antiserum were prepared. then, we were measured beta antitoxin by elisa and serum neutralization simultaneously and the results were analyzed by spss software.the negative control cutoff was calculated 0.485 and crossexamination was shown that beta toxin used in this study has no cross reaction with other toxins of clostridium perfringens and its repeatability was assessed using standard deviation (for medium specimen: sd=0.033 cv=7.25) the results of this study showed that there is a significant agreement between in vivo and in vitro tests for serum samples of vaccinated rabbits by enterotoxaemia vaccine. linear regression analysis gave correlation coefficients of 0.84 for the indirect elisa, with a significance level of p < 0.01. sensitivity, positive and negative predictive value of elisa in these samples was 100%, 84.21% and 100%, respectively. finally, elisa systems are suitable candidates to replace the mnt used for detection antibody in laboratory animals. however, further research in this field is needed for target animals.