بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتیاز (rpr) ویروس hiv با روش topo-cloning در باکتریbl21

سابقه و هدف : پروتیاز hiv نقش مهمی در بلوغ ویروس و تحریک پاسخ ایمنی میزبان دارد. به همین دلیل می تواند هم به عنوان یک هدف درمانی و هم در تست های تشخیصی کاربرد داشته باشد. در مطالعات قبلی، تولید rpr با مشکلاتی مثل سمیت، آبگریز بودن و تخلیص روبرو بوده است. هدف از این مطالعه، استفاده از سیستم بیانی pet102/d.topo برای غلبه بر مشکلات اشاره شده بود.مواد و روشها: پس از جداسازی ژن پروتیاز از ژنوم hiv، فرایند کلونینگ با استفاده از سیستم topo cloning در وکتور بیانی pet102/d.topo انجام شد. بعد از القای بیان ژن با iptg، پروتیین تولید شده با استفاده از روش کروماتوگرافی حاوی ستون ni-nta تخلیص شد و غلظت آن با استفاده از کیت بررسی پروتیین bca سنجیده شد. تولید پروتیین نوترکیب با sds-page و وسترن بلاتینگ بررسی شد.یافته ها : کلونینگ ژن پروتیازhiv-1 با استفاده از سیستم کلونینگ topo در وکتور بیانی pet102/d بوسیله pcr با موفقیت صورت گرفت و با sequencing تایید شد. غلظت rpr پس از تخلیص بین 60 تا 85 میکروگرم در میلی لیتر بود. بیان و تولید rpr به شکل محلول، با موفقیت انجام شد. و با sds-page و وسترن بلات تایید شد.بحث و نتیجه گیری : در سیستم کلون سازی مورد استفاده به دلیل بیان rpr به صورت فیوز شده با تیوردوکسین و دارای برچسپ های هیستیدینی، مشکل سمیت،آبگریز بودن و تخلیص تا حد زیادی برطرف شد. با توجه به میزان rpr تولید شده، می توان از آن در تست های تشخیصی و جهت بررسی و طراحی مهارکننده های پروتیاز در مطالعات بعدی استفاده کرد.