مطالعه و ارزیابی کلون کردن ژن آنزیم L-آسپاراژینازΙΙ Escherichia coli در Bacillus subtilis

سابقه و هدف: ال-آسپاراژیناز ?? کاربرد موثری در درمان لوسمی لنفوبلاستیک (all) دارد. این آنزیم از منابع باکتریایی جدا شده و به صورت تجاری به عنوان داروی ضدسرطان عرضه می شود. سلول های سرطانی برخلاف سلول های نرمال، نیاز شدیدی به ال-آسپاراژین دارند، در صورت به کارگیری ال-آسپاراژیناز ?? (e.c. 3.5.1.1) ال-آسپاراژین به ال-آسپارتات و آمونیوم تبدیل می شود که در نهایت به تخریب سلول های سرطانی منجر می شود. هدف از این پژوهش، کلون-کردن ژن ال-آسپاراژیناز ?? e. coli در b. subtilis جهت تولید انبوه این آنزیم انجام گرفت.مواد و روش ها: ژن ال-آسپاراژیناز ?? (ansb) با روش pcr از e. colibl21 جدا گردید. قطعه تکثیر یافته و شاتل وکتور بیانی pmr12 توسط آنزیم های hind???، bamh? هضم شد. واکنش اتصال بین قطعه ی pcr و شاتل وکتور بیانی برش خورده با روش استاندارد انجام گرفت. در مرحله ی بعد، وکتور نوترکیب با روش شوک با cacl2 سرد بهe. colijm101 ترانسفورم شد. در نهایت به میزبان b. subtilis با روش شیمیایی انتقال یافت.یافته ها: در این مطالعه، ژن ansb به وسیله pcr از e. colibl21 جدا و توسط تجزیه و تحلیل آنزیمی محصول pcr تایید گردید و در شاتل وکتور بیانی pmr12 کلون شد. سپس وکتور نوترکیب ابتدا در e. coli کلون گردید و وجود ژن 1047 bp با تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش pcr تایید شد به دنبال آن داخل b. subtilis کلون شد و استخراج پلاسمید انجام گرفت و با باند شاتل وکتور بیانی pmr12 دارای ژن ansb به صورت صحیح، مقایسه و تایید گردید.نتیجه گیری: در این تحقیق با استفاده از شاتل وکتور بیانی pmr12 ژن ansb را در b. subtilis کلون شد. این مطالعه، اولین گزارش کلونینگ ژن ansb در b. subtilis است.