ساخت کتابخانه ژنی آنتی‌بادی ScFv انسانی بر پایه T Vector علیه توکسین کزاز

سابقه و هدف: امروزه آنتی‌بادی‌ها‌ در حوزه‌های تشخیص و درمان جایگاه ویژه‌ای را به خود اختصاص داده‌اند. در این‌ میان، آنتی‌بادی‌های مونوکلونال کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن و کارایی بالا در درمان بیماری‌ها مورد توجه قرار‌گرفته‌اند. تحقیق پیش‌رو به‌منظور ساخت کتابخانه ژنی آنتی‌بادی نوترکیب انسانی از یک فرد واکسینه با توکسویید کزاز انجام گرفته است.مواد و روش‌ها: ابتدا از فرد ایمن با توکسویید کزاز خون گرفته شد. سپس لنفوسیت‌ها جدا و rna از آن ها استخراج گردید. همه تنوع ژن‌های ناحیه متغیر زنجیره‌های سبک و سنگین آنتی‌بادی به روش rt-pcr تکثیر و به صورت scfv به یکدیگر متصل شدند. سپس این قطعات به داخلt vector الحاق و به باکتریe. coli dh5? انتقال یافتند. پس از آن، الایزا صورت گرفت. جهت تایید کتابخانه ژنی آنتی‌بادی، پلاسمید آن استخراج و توالی‌یابی انجام شد.یافته ها: کیفیت cdna با انجام واکنش توسط پرایمرهای ژن hprt تایید شد. صحت انجام مراحل pcr و کلونینگ، توسط الکتروفورز ژل ‌آگارز و برش آنزیمی مورد تایید قرار‌گرفت. باکتری‌های حاوی پلاسمید نوترکیب با رشد روی محیط کشت بر اساس رنگ آبی و سفید، مشخص شدند. از کلون‌ها پلاسمید استخراج و توالی‌یابی انجام شد. نتایج حاصل از تشابه توالی‌ها در پایگاه داده ی igblast نشان داد که این توالی‌ها مربوط به ژن آنتی‌بادی انسانی می‌باشند. هم چنین توسط الایزا تایید این که آنتی بادی اختصاصی توکسین کزاز می باشد، صورت گرفت.نتیجه گیری: در این تحقیق کتابخانه آنتی‌بادی انسانی از فرد ایمن با توکسویید کزاز، ساخته شد. سپس، ژن آنتی بادی موجود در این کتابخانه توسط توالی یابی و هم ترازی در پایگاه ncbiمورد تایید قرار گرفت و الایزا اختصاصیت این آنتی بادی ها را مشخص نمود. در‌ ادامه جهت یافتن ژن آنتی‌با‌دی‌ اختصاصی توکسین‌کزاز در این کتابخانه، لازم است غربال گری به روش نمایش ‌فاژی انجام‌ شود.