بررسی اثر سویه پروبیوتیک لاکتوباسیلوس گسری بر القای آپوپتوز در سلول های ags تیمار شده با وزیکل‌های خارج سلولی هلیکوباکتر پیلوری

سابقه و هدف: عفونت هلیکوباکتر پیلوری به‌عنوان عامل خطر اصلی مرتبط با گاستریت مزمن و آدنوکارسینوم معده شناخته می‌شود. وزیکول‌های خارج‌سلولی از جمله فاکتورهای بیماری‌زایی کلیدی این باکتری هستند که در ایجاد التهاب و مهار فرآیند آپوپتوز در سلول‌های میزبان نقش دارند. سویه‌های پروبیوتیک از جمله گونه‌های لاکتوباسیلوس می‌توانند در القای فرایند آپوپتوز سلولی نقش ایفا کنند. این مطالعه با هدف بررسی اثر لاکتوباسیلوس گسری atcc 33323 بر فرایند آپوپتوز در سلول‌های ags تحت‌تیمار با وزیکول‌های خارج‌سلولیِ هلیکوباکتر پیلوری موردارزیابی قرار گرفت.مواد و روش‌ها: وزیکول‌های خارج‌سلولی از دو سویۀ هلیکوباکتر پیلوریِ بالینی (by-1 و oc824) جدا شدند. شناسایی مورفولوژی وزیکول‌های خارج‌سلولی به‌وسیلۀ میکروسکوپ الکترونیِ گذاره و تکنیک پراکندگی نور پویا انجام شد. زنده‌مانی سلول‌های ags در حضور مقادیر مختلف وزیکول‌های خارج‌سلولی هلیکوباکتر پیلوری و مایع رویی بدون سلول حاصل از کشت لاکتوباسیلوس گسری بررسی شد. بر اساس سنجشmtt  50 میکروگرم در میلی‌لیتر وزیکول‌های خارج‌سلولی هلیکوباکتر پیلوری و 10 درصد حجمی/حجمی از مایع روییِ کشت لاکتوباسیلوس گسری برای آزمایش‌‌های بیشتر استفاده شد. آپوپتوز با استفاده از آنالیز rt-qpcr برای واسطه‌های کلیدی آپوپتوز ( bax، cas3، cas8، cas9، bcl-2  و nod1)، موردبررسی قرار گرفت.نتایج: وزیکول‌های خارج‌سلولیِ هلیکوباکتر پیلوریدر محدودۀ اندازۀ 50-200 نانومتر شناسایی شدند. بر اساس نتایج سنجش زنده‌مانی سلول‌های ags، برای تیمار سلولی از 50 میکروگرم در میلی‌لیتر وزیکول‌های خارج‌سلولی هلیکوباکتر پیلوری و 10 درصد حجمی/حجمی از مایع روییِ کشتِ لاکتوباسیلوس گسری استفاده شد. وزیکول‌های خارج‌سلولی هلیکوباکتر پیلوری بیان‌ژن‌های bax، cas3، cas8، cas9 را کاهش دادند و بیان bcl-2 و گیرندۀ nod1 را در سلول‌های ags در زمان‌های 12 و 24 ساعت افزایش دادند. در مقابل، مایعِ روییِ لاکتوباسیلوس گسری به‌طور موثر آپوپتوز مهارشدۀ ناشی از وزیکول‌های خارج‌سلولی را القا نمود.نتیجه‌گیری: مطالعۀ حاضر نشان داد که مایعِ روییِ لاکتوباسیلوس گسری می‌تواند به‌طور موثر آپوپتوز مهارشدۀ ناشی از وزیکول‌های هلیکوباکتر پیلوری را در سلول‌های ags القا کند. تحقیقات بیشتر برای کشف مکانیسم اثر مایعِ روییِ کشت لاکتوباسیلوس گسری و متابولیت‌های آن بر القای آپوپتوز موردنیاز است.

investigating the effect of probiotic strain lactobacillus gasseri on induction of apoptosis in ags cells treated with extracellular vesicles of helicobacter pylori

aim and background: helicobacter pylori infection is known as the main risk factor associated with chronic gastritis and gastric adenocarcinoma. extracellular vesicles are among the key virulence factors of this bacterium, which play a role in inducing inflammation and inhibiting the apoptosis process in host cells. probiotic strains, including lactobacillus species, can play a role in inducing the process of cellular apoptosis. this study aimed to evaluate the effect of l. gasseri atcc 33323 on the apoptosis process in ags cells treated with extracellular vesicles (evs)  of h. pylori.materials and methods: evs were isolated from two clinical strains of h. pylori (by-1 and oc824). the morphology of evs was identified by transmission electron microscopy and dynamic light scattering. the viability of ags cells was examined in the presence of various amounts of h. pylori evs and l. gasseri cell-free supernatant (cfs). based on the mtt assay, 50 μg/ml of h. pylori evs and 10% v/v of l. gasseri cfs were used for further experiments. apoptosis was investigated using rt-qpcr targeting key apoptosis mediators (bax, casp3, casp8, casp9, bcl2, and nod1).results: h. pylori evs were identified in the size range of 50-200 nm. based on the results of cell viability assays in ags cells, 50 micrograms per milliliter of h. pylori extracellular vesicles and 10% (v/v) of l. gasseri culture supernatant were used for cell treatment. h. pylori evs downregulated the gene expression of bax, casp3, casp8, and casp9 and upregulated bcl2, and nod1 in ags cells at 12 and 24 h. in contrast, l. gasseri cfs effectively induced cell apoptosis, which was inhibited by evs.conclusion: the present study showed that l. gasseri cfs can effectively induce h. pylori ev-inhibited apoptosis in ags cells. further research is needed to elucidate the precise function of l. gasseri cfs and its metabolites in the induction of apoptosis.