تولید آنتی بادی مونوکلونال ضدزنجیره سنگین igm ماهی کپور معمولی

مقدمه: آنتی‌بادی‌های مونوکلونال کاربردهای مختلفی در مطالعات ایمنی شناسی، ایمونوهیستوشیمی، تشخیص و درمان بیماری‌های آبزیان دارند. تولید آنتی‌بادی مونوکلونال ضد ایمنوگلوبولین ماهی کپور به دلیل عدم دسترسی آن در کشور هدف این تحقیق بود. مواد و روش ها: ابتدا igm سرم با استفاده از ترسیب با سولفات آمونیوم و دیالیز تخلیص نسبی گردید. پس از تهیه igm نیمه خالص، این آنتی‌بادی برای ایمن سازی موش‌های balb/c شش تا هشت هفته ای مورد استفاده قرار گرفت. سپس سلول‌های طحال موش‌های دارای ایمنی بالا برداشته شده و با سلول‌های میلوما ادغام شدند. پس از حدود ده روز گرم خانه گذاری در انکوباتور co2، مایعات رویی سلول‌های هیبریدومای تولید شده با سرم ماهیان ایمن شده با mbp و کنژوگه پراکسیداز ضد ایمونوگلوبولین موش، به روش الایزا مورد غربالگری قرار گرفتند. هیبریدوماهایی که در مایع رویی آن‌ها آنتی‌بادی قادر به شناسایی igm ماهی متصل شده به mbp وجود داشت، از نظر تولید آنتی‌بادی مونوکلونال ضد igm ماهی مثبت محسوب شده و سه بار تحت کلونینگ قرار گرفتند. سپس با استفاده از sds page و وسترن بلاتینگ، ویژگی آنتی‌بادی‌های تولید شده از نظر واکنش با زنجیر سنگین igm دناتوره شده و واکنش با مولکول کامل یا تترامر igm در شرایط غیردناتوره کننده تایید شد. هم چنین در ادامه قابلیت آنتی بادی‌های مونوکلونال تولید شده برای ردیابی آنتی‌بادی‌های ضد آلبومین سرم گاو و گلبول قرمز گوسفند در سرم ماهیان ایمن شده با این مواد بررسی و تایید گردید.نتایج: نتایج sds page نشان داد که زنجیره مونومرآنتی بادی مونوکلونال ضدزنجیره سنگین igm کپور معمولی در محدوده 75 کیلودالتن و زنجیره تترامر در محدوده 760 کیلو دالتون به خوبی مشاهده شد. هم چنین آنتی بادی مونوکلونال توانایی تفکیک سرم ماهیان گروه ایمن شده با rbc گوسفند و آلبومین سرم گاوی از ماهیان گروه کنترل بوده است. بحث و نتیجه گیری: نتایج تولید آنتی بادی مونوکلونال ضدزنجیره سنگین igm کپور معمولی به روش نیمه خالص سازی سرم توسط سولفات آمونیوم با موفقیت همراه بوده است.

production of monoclonal antibody against igm of common carp(cyprinus carpio)

introduction: monoclonal antibodies widely used in different immunological studies,immunohistochemistry, diagnosis and treatment of aquatic diseases. this study was aimed toproduct anti heavy chain immunoglobulin m of common carp, due to its inaccessibility iniran.materials & methods: in order to produce anti igm monoclonal antibody of carp, initiallyserum igm was partially purified through ammonium sulfate sedimentation method.prepared semi purified igm, was injected to the balb/c mice with six to eight weeks age.afterwards, the spleen cells of one of the high immunity mice was removed to producemonoclonal antibody and merged with myeloma cells. after about 10 days of incubation inco2 incubator, fluids of produced hybridoma cells, serum of mbp immunized fish andanti immunoglobulin conjugated peroxidase in mice were screened by elisa method. thehybridomas that antibodies in their supernatant were able to detected fish mbp linked igm,considered positive for the production of anti igm monoclonal antibodies and cloned againthree times. subsequently, sds page and western blotting were used in denatured conditionand non denatured conditions to detect the antibodies produced in response to igm heavychain. moreover, produced anti carp igm monoclonal antibodies capability to detectanti albumin and anti sheep rbc antibodies in serum of immunized fish with albumin andsheep rbc were verified and conformed.results: the results of sds page gel showed that common carp monoclonal antibodyanti chain igm monomer chain well seen in the range of 75 kda and tetramer chain in the760 kda range. moreover, the monoclonal antibody has the ability to separate the group ofimmunized rbc sheep and bovine serum albumin from the control group.conclusion: the results of the production of igm anti chain monoclonal antibody,commonly produced by ammonium sulfate, have been successfully performed bysemi purification of the serum.