تعیین جنسیت گوزن قرمز (زیرگونه مرال) با استفاده از تکنیک Duplex Pcr به عنوان، روشی مناسب برای تخمین اندازه موثر جمعیت، جهت طراحی برنامه های حفاظت ژنتیکی آن در زیستگاه های کشور

به علت اندازه کوچک جمعیت و ایزوله شدن گوزن قرمز زیرگونه مرال (cervus elaphus)  در منطقه حفاظت شده ارسبارانآینالو، مقدار هم خونی  بالاست. کنترل جنسیت جهت حفظ اندازه موثر جمعیت در حد مناسب، امکان ایجاد هم خونی را کاهش می دهد. هدف از تحقیق حاضر، دستیابی و بهینه سازی تکنیک تعیین جنسیت در گوزن مرال به عنوان روشی مناسب برای تخمین اندازه موثر جمعیت و حفاظت ژنتیکی آن در ارسباران و زیستگاه های کشور می باشد. در این مطالعه نمونه خون از ورید وداجی و ورید دمی‌ گوزن ها به مقدار 5 سی سی در داخل‌ لوله‌های‌ حاوی‌ خلا و edta  تهیه و به‌ بانک ژن اداره کل حفاظت محیط زیست آذربایجان شرقی منتقل‌ گردید. روش duplex pcr بر طبق آغازگرهای کروموزوم (y) تعیین جنسیت منطبق با ژن deadbox ylinked protein (dby) جایگاه ریزماهوارک bmc1009 به عنوان کنترل داخلی تکثیر شد. پس از دستیابی به شرایط بهینه تکنیک و تایید جنسیت نمونه های با جنسیت معلوم از پیش تعیین شده، بار دیگر اقدام به جمع آوری مدفوع و استخراج dna از نمونه های با جنسیت مجهول و تعیین جنسیت آن ها گردید. نتایج این تحقیق با تکرارپذیری بالا، وجود دو باند 310280 (ریزماهوارک پلی مورف) و 180 جفت باز (bp) در گوزن های نر و 310280 (ریزماهوارک پلی مورف) جفت باز (bp) در گوزن های ماده را نشان داد. نتایج ژنوتایپینگ نشان داد که تعداد 8 ماده و 15 نر شناسایی شد و شاخص اندازه موثر جمعیت (4) محاسبه گردید.

Sex determination in Red deer (Ceruvus elaphus maral); suitable method for estimating the effective population size for genetic conservation programs in the country habitats

Unfortunately, due to the small population size and isolation of red deer (Cervus elaphus) in protected areaArasbaranAynalu, there are inbreeding and the highly rate of bottleneck. Sex controlling for sex maintain effective population size as appropriate, may reduce inbreeding. For this purpose the objective of this study was access and optimization techniques for Sex determination in Red deer(Ceruvus elaphus); suitable method for estimating the effective population size for genetic conservation programs in Arasbaran and the country habitats. For this purpose, bleeding in deer, taken from jugular vein and tail vein after anesthesia, blood samples in tubes containing EDTA vaccum with ice 40c to the gen bank of Department of East Azerbaijan was transferred. Duplex PCR using primers based on the chromosome (Y) in accordance with the sexdetermining gene DEADbox Ylinked protein (DBY) simultaneously used with BMC1009 locus were amplified as an internal control per each reaction. The results are reliable, there are two bands 280310 (polymorphic band) and 180 base pairs (bp) in male deer and 280310 (polymorphic band) base pairs (bp) in female deer showed. To confirm this, residual PCR products was applied for sequencing. Genotyping results showed that 8 females and 15 males were identified as indicators of effective population size 4, respectively.