جداسازی و شناسایی ترکیب اسیدهای آمینه در گوشت ماهی کپور دریایی (Cyprinus Carpio) حوزه جنوبی دریای خزر

مطالعه حاضر به منظور جداسازی و تشخیص اسیدهای آمینه ضروری موجود در بافت عضله ماهی کپورمعمولی (cyprinus carpio) صورت گرفت. بدین منظوردر سال 1397 تعداد سه قطعه ماهی کپورمعمولی از پره های مستقر در سواحل جنوبی دریای خزر نمونه برداری و پس از زیست سنجی، بافت هدف (عضله) ماهیان جداسازی و در مخزن ازت با دمای 196 درجه سانتی گراد نگه داری شدند. در آزمایشگاه، جهت استخراج پروتئین از روش حل کردن/ رسوب دادن در نقطه ایزوالکتریک، تبدیل پروتئین به اسیدآمینه با روش هیدرولیز اسیدی و برای جداسازی اسیدهای آمینه ضروری از روش کروماتوگرافی لایه نازک استفاده گردید. در این روش از صفحات تجاری tlc silica gel 60f254  (ساخت شرکت مرک آلمان) به عنوان فاز ساکن و از فاز متحرک (بوتانل/اسید استیک/آب) به نسبت های (1:2:4) تهیه و جهت آشکارسازی اسیدهای آمینه از معرف نین هیدرین استفاده گردید. مقدارکمی اسیدهای آمینه و فاکتور بازداری (rf) آن ها محاسبه گردید. فاز متحرک  و ساکن بهینه سازی شده و با کیفیت بالا جداسازی را نشان می دهد. یافته ها به روش کروماتوگرافی لایه نازک (tlc) نشان دادند که تمامی اسیدهای آمینه ضروری (آرژنین، هیستیدین، فنیل آلانین، ایزولوسین، ترئونین، والین، لوسین، متیونین و لیزین) در بافت عضله ماهی کپور وجود دارد. اسیدآمینه تریپتوفان به دلیل هیدرولیز اسیدی تخریب و مشاهده نگردید. ارزیابی ترکیب 17 اسیدآمینه ضروری و غیرضروری به وسیله کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (hplc) اختلاف معنی داری را بین اسیدهای آمینه نشان داد به طوری که بیش ترین میزان اسیدآمینه در گوشت ماهی کپور به لیزین وگلوتامیک اسید و کم ترین میزان به آسپارتیک اسید و متیونین اختصاص دارد. بنابراین با توجه به عدم توانایی بدن انسان در ساخت اسیدهای آمینه ضروری، مصرف کپورماهیان در جیره غذایی می تواند به عنوان تامین کننده نیازهای تغدیه ای انسان در رشد، تولید انرژی، عضله سازی و درمان بسیاری از بیماری ها به شمار آید.

Investigation of Amino Acids composition in Common Carp (Cyprinus carpio Linnaeus, 1758) using High-performance Liquid Chromatography (HPLC) and Thin Layer Chromatography (TLC) from the southern of Caspian Sea

The present study aimed to isolate and detect essential amino acids (EAAs) in muscle tissue of common carp (Cyprinus carpio). Fish contains the highest protein content. Three pieces of common carp were collected from gillnets found on beaches of the southern Caspian Sea. Biometrics of collected samples were determined. Target tissue (muscle) of the fish was isolated and kept in nitrogen tanks at 196°C. Dissolution/deposition techniques were used to extract protein from the fish flesh at the isoelectric point, proteins were hydrolyzed into amino acids, and thin layer chromatography (TLC) was used to isolate essential amino acids in the laboratory. Commercial TLC silica gel 60 F₂₅₄ plates (made by Merck, Germany) were used as the stationary phase and butane/acetic acid/water as the mobile phase. Ninhydrin reagent was used to detect amino acids. Quantitative amino acid analysis was carried out and the retention factor (Rf) was calculated. TLC results showed that all EEAs (Arginine, Histidine, Phenylalanine, Isoleucine, Threonine, Valine, Leucine, Methionine and Lysine) were present in muscle tissue of common carp. Tryptophan was totally destroyed with acid hydrolysis and not detected in the analysis. Analysis of 17 essential and nonessential amino acids showed that the highest EAA content of fish flesh belonged to Lysine, Glutamic acid and the lowest content belong to Aspartic acid and Methionine. Since human body cannot synthesize EAAs, common carp should be included in human diet because it is a general source of nutritional components that contribute to growth, energy production, muscle building and treatment of many diseases.